擬VD大鼠學(xué)習(xí)記憶與NMDA、AMPA受體亞單位、離子通道關(guān)系探討及人參皂苷Rg-,2-的干預(yù).pdf

1、目的：在慢性腦低灌注擬血管性癡呆(VD)大鼠模型上，探討相關(guān)興奮性氨基酸受體-谷氨酸受體的離子型受體NMDA受體亞型NR1、NR2A、NR2B和AMPA受體亞型GluR2的基因表達(dá)和對(duì)學(xué)習(xí)記憶影響關(guān)系的可能機(jī)制和人參皂苷Rg2干預(yù)作用以及人參皂苷Rg2對(duì)腦神經(jīng)元電壓門控K+、Na+、Ca2+離子通道的影響。興奮性氨基酸(EAA)在血管性癡呆(Vasculardementia，VD)的發(fā)病機(jī)制中起著一定的作用，其中谷氨酸可能起著更重要的作

2、用。由于谷氨酸(Glu)及其受體(GluR)參與了突觸的發(fā)生、延伸及以突觸可塑性為生理基礎(chǔ)的學(xué)習(xí)、記憶等過程的諸多機(jī)制，而且Glu的神經(jīng)毒性通過它的受體發(fā)揮作用，所以探討GluR的異常與癡呆的發(fā)病關(guān)系具有十分重要的意義。 VD為一臨床常見慢性進(jìn)行性疾病，主要與缺血性腦病有關(guān)。腦缺血后鈉、鉀和鈣離子通道的通透性異常和神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)外離子平衡的紊亂是缺血性腦損傷的重要機(jī)制之一，離子穩(wěn)態(tài)的失衡發(fā)生在缺血的早期階段，引發(fā)了隨后的一系列級(jí)聯(lián)反

3、應(yīng)，最終導(dǎo)致VD患者出現(xiàn)智力和行為的異常。該病的發(fā)生機(jī)制復(fù)雜，目前尚未完全闡明，迄今為止尚無理想的治療VD的有效藥物，因此我們探討上述機(jī)制的同時(shí)，還觀察了人參皂苷Rg2的干預(yù)作用，分析其神經(jīng)保護(hù)作用的可能途徑。 方法：(1)2-VO法(雙側(cè)頸總動(dòng)脈永久性結(jié)扎)造成慢性腦低灌注前腦缺血，制成擬血管性癡呆大鼠模型。(2)動(dòng)物模型評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)及檢測(cè)方法：手術(shù)后1d，分別對(duì)術(shù)后大鼠進(jìn)行卒中指數(shù)、神經(jīng)病學(xué)癥狀評(píng)定。(3)開場(chǎng)行為(Openfi

4、led)法：分別給予不同劑量的人參皂苷治療，并與鈣拮抗劑尼莫地平進(jìn)行對(duì)照。術(shù)后5d，檢測(cè)模型大鼠的探究反應(yīng)和自發(fā)活動(dòng)。用以檢測(cè)其行為變化及為下一步水迷宮作準(zhǔn)備。(4)水迷宮(Watermaze)行為學(xué)檢測(cè)：Openfiled之后，然后分別于術(shù)前、術(shù)后6、7d采用水迷宮法檢測(cè)各組大鼠行為變化。(5)RT-PCR方法，以β-actin為內(nèi)參，檢測(cè)NMDAR1、NR2A、NR2B、GluR2的mRNA水平表達(dá)的變化。(6)在以上研究的基礎(chǔ)上，

5、用膜片鉗技術(shù)進(jìn)一步觀察人參皂苷Rg2對(duì)腦神經(jīng)元電壓門控K+、Na+、Ca2+離子通道的影響。 結(jié)果：(1)通過對(duì)動(dòng)物模型卒中指數(shù)和神經(jīng)病學(xué)癥狀觀察，證明帶有血管性癡呆行為特征的動(dòng)物模型成功。(2)Openfield試驗(yàn)顯示：模型鼠垂直運(yùn)動(dòng)和水平運(yùn)動(dòng)均減少，與假手術(shù)鼠相比有顯著性差異(P＜0.01)。(3)Watermaze檢測(cè)：學(xué)習(xí)和記憶能力明顯降低，表現(xiàn)為：模型組信息游泳時(shí)間延長(zhǎng)，選擇游泳時(shí)間延長(zhǎng)，正確率降低，與正常組及假手術(shù)

6、組比較有顯著性差異(P＜0.01)。(4)人參皂苷Rg22.5，5，10mg/kg可以劑量依賴性縮短大鼠的信息游泳和選擇游泳時(shí)間，和模型組相比有顯著性差異，尼莫地平未見明顯縮短大鼠的信息游泳和選擇游泳時(shí)間。(5)采用RT-PCR方法，以β-actin為內(nèi)參，模型組與正常組相比，NMDAR1表達(dá)增強(qiáng)(P＜0.05)，而NR2A、NR2B、GluR2的表達(dá)減弱(P＜0.01)；與模型組相比，人參皂苷Rg2組NMDAR1基因表達(dá)減弱(P＜0.

7、01)，而NR2A、NR2B、GluR2表達(dá)增強(qiáng)(P＜0.05，0.01)；尼莫地平組未見明顯改變。(6)在非缺氧條件下，膜片鉗顯示人參皂苷Rg2對(duì)正常海馬神經(jīng)元細(xì)胞K+、Na+、Ca2+離子通道無明顯影響。 結(jié)論：(1)本研究證實(shí)了慢性腦低灌注擬血管性癡呆大鼠的探究能力和自發(fā)活動(dòng)顯著降低、學(xué)習(xí)記憶能力下降，腦組織NMDAR1的基因表達(dá)增強(qiáng)、而NR2A、NR2B、GluR2降低。(2)人參皂苷Rg2通過調(diào)控NR1，NR2A，NR