HLA氨基酸殘基配型在角膜移植中的應用研究.pdf

1、研究背景: 角膜病已成為僅次于白內障的第二大致盲原因，目前治療角膜盲的主要手段仍然是角膜移植，但免疫排斥反應仍是導致手術失敗的最主要原因。如何有效防治移植排斥反應是提高角膜移植手術成功率的關鍵因素之一。 近年有關學者認為：造成高危角膜移植術后免疫排斥反應的一個重要原因是供體和受體MHC 之間的抗原差異性和組織不相容造成的。關于HLA抗原配型在角膜移植中的應用已有大量報道，但多為回顧性研究，也存在明顯爭議。以往采用的HLA

2、 六抗原配型標準在臨床應用受到諸多客觀條件的限制，不便于術前的供體選擇。Terasaki 教授等提出的HLA 氨基酸殘基配型并應用于腎移植取得成功經驗，提示角膜移植術前進行HLA 配型成為可能。為此，本課題提出設想，通過HLA-Ⅰ類和HLA-Ⅱ類抗原位點檢測，將HLA 氨基酸殘基配型應用于角膜移植的供體和受體選擇，以減少供體和受體之間的MHC 抗原差異，增加供體和受體之間的組織相容性，降低術后的排斥反應發(fā)生率，提高手術成功率。

3、 方法、結果和結論: 1.離體角膜HLA 抗原表達的應用基礎研究 目的：檢測離體角膜上皮和內皮細胞HLA-A、B、C 和HLA-DR位點抗原的表達量，為角膜移植術前進行HLA 組織配型提供一試驗依據。 方法：對40 只健康成人離體眼球的角膜細胞進行體外培養(yǎng)，采用間接免疫螢光技術標記HLA-A、B、C 和HLA-DR 抗原，用ACAS-570 激光掃描細胞儀分析細胞表面抗原。 結果：正常角膜上皮和內皮

4、細胞均可見HLA-A、B、C 位點的表達，而無HLA-DR位點的表達。角膜上皮和內皮細胞的HLA-A、B、C 位點表達的熒光強度分別為601.0±22.6 和511.5±20.5（P<0.01）。 結論：正常成人眼角膜上皮和內皮細胞存在有HLA-A、B、C 抗原的分布和表達。 2.HLA 氨基酸殘基配型應用于外傷或角膜潰瘍的初步研究 目的：將HLA 氨基酸殘基配型應用于嚴重眼外傷和感染性角膜盲患者術前的供受

5、體選擇，初步評價其在角膜移植中的作用。 方法：選擇4 例嚴重眼外傷和角膜潰瘍患者，術前供體和受體進行HLA-Ⅰ類和HLA-Ⅱ類抗原位點檢測。HLA 檢測方法：單克隆抗體一步法或Micro-SSP 方法，或快速免疫磁珠法提取淋巴細胞，采用HLA 氨基酸殘基配型策略進行HLA 氨基酸殘基配型，選擇HLA 抗原位點低錯配的供體和受體。角膜移植術后常規(guī)應用抗排斥藥物治療。 結果：選擇低錯配的供體，未出現(xiàn)排斥反應。 結

6、論：HLA-Ⅰ類和HLA-Ⅱ類抗原位點檢測方法簡便迅速、結果可靠，角膜移植術前進行HLA 配型切實可行。 3.HLA 氨基酸殘基配型應用于高危角膜移植 目的：初步評價HLA 氨基酸殘基配型應用于高危角膜移植中的效果。 方法：44 例高危角膜盲患者，均為角膜新生血管豐富、角膜已結膜上皮化或藥物治療無效的感染性角膜潰瘍，根據HLA位點的相配數目分為4 組：HLA 的2 錯配組、3 錯配組、4 錯配組和5 錯配組

7、；又將2 錯配組和3 錯配組歸入低錯配組，將4 錯配組和5 錯配組歸入高錯配組。分析高危角膜病人與供體之間的HLA 抗原位點相配情況，并比較高錯配組和低錯配組的排斥反應發(fā)生率。 結果：術后排斥反應發(fā)生率為79.5％，在2、3、4 和5錯配組中分別為9.1％、11.3％、27.3％和31.8％。高錯配組和低錯配組的排斥反應發(fā)生率分別為59.1％和20.4％，經Fisher 精確檢驗P=0.044，兩組間有顯著性差異，相對危險度R

8、R=1.5。表明HLA高錯配組的排斥反應發(fā)生率明顯高于低錯配組，其排斥反應的危險性是低錯配組的1.5 倍。低錯配組的用藥時間較短，出現(xiàn)排斥反應時，藥物治療效果較佳，而高錯配組藥物治療效果欠佳，全身用藥時間較長。 結論：對于高危角膜患者，術前進行HLA 氨基酸殘基配型選擇低錯配的供體，可降低排斥反應發(fā)生率。 4.HLA 氨基酸殘基配型應用于眼外傷后的角膜移植 目的：比較眼外傷后的高危角膜組和低危角膜組中HLA

9、 氨基酸殘基配型的作用程度，進一步評價其應用于眼外傷后的角膜移植中的效果。 方法：66 例（67 眼）外傷性角膜盲患者，分為新生血管豐富的高危角膜組（51 眼）和單純角膜白斑的低危角膜組（16眼），同樣根據HLA 位點的相配數目分為4 組：HLA 的2 錯配組、3 錯配組、4 錯配組和5 錯配組；又將2 錯配組和3 錯配組歸入低錯配組，將4 錯配組和5 錯配組歸入高錯配組。 結果：高危和低危角膜組的排斥發(fā)生率分別為7

10、6.5％和31.3 ％，χ2＝11.047，P=0.001，兩組間有非常顯著性差異。高危角膜組中，高錯配和低錯配組的排斥反應率分別為90.5％和63.2％，經Fisher 精確檢驗P=0.00461，兩組間有非常顯著性差異，相對危險度RR=1.772。低危角膜組中，高錯配和低錯配組的排斥反應率分別為33.3％和25.0％，經Fisher 精確檢驗P=1.00，無統(tǒng)計學差異。高危角膜組的排斥反應較重，需要全身用藥，而低危角膜組排斥反應輕，

11、局部用藥易于控制。 結論：眼外傷后新生血管豐富的高危角膜，術前進行HLA氨基酸殘基配型選擇低錯配的供體可降低排斥反應發(fā)生率，而對于低危角膜患者，術前HLA 配型意義不大。 小結，本課題通過應用基礎研究與臨床應用研究緊密結合，在國內率先將HLA 氨基酸殘基配型應用于眼科領域，首次將HLA氨基酸殘基配型應用于角膜移植術前的供受體選擇。術前通過選擇低錯配的供受體，降低了高危角膜移植術后免疫排斥反應發(fā)生率，提高了手術成功率。