芪藍(lán)糖脂寧膠囊復(fù)方再優(yōu)化研究及其糖脂雙調(diào)的機(jī)理探討.pdf

1、糖尿病(Diabetes Mellitus，DM)是一種常見的內(nèi)分泌代謝性疾病，其基本病理特點為胰島素分泌絕對或相對不足，或外周組織對胰島素不敏感，引起以糖代謝紊亂為主，包括脂肪、蛋白質(zhì)代謝紊亂的一種全身性疾病。因此，單純控制血糖不能完全消除糖尿病患者冠心病等大血管并發(fā)癥，往往同時進(jìn)行調(diào)脂治療。中醫(yī)傳統(tǒng)復(fù)方注重整體調(diào)節(jié)，標(biāo)本兼治，近年來，在治療糖尿病合并高脂血癥方面表現(xiàn)了巨大的潛力。 芪藍(lán)糖脂寧膠囊是導(dǎo)師高學(xué)敏教授針對糖尿病合并

2、高脂血癥的病因病機(jī)，在中醫(yī)基礎(chǔ)理論指導(dǎo)下，結(jié)合現(xiàn)代藥理學(xué)研究成果創(chuàng)制的科研處方。前期張德芹博士已對其進(jìn)行了文獻(xiàn)、理論和藥效學(xué)實驗研究，證明其有顯著的糖脂雙調(diào)的效果，是治療糖尿病合并高脂血癥的有效良方。但是，該方含有黃芪、絞股蘭、紅曲等九味中藥，藥味較復(fù)雜，為生產(chǎn)、質(zhì)控和服用都帶來了不便，因此，本課題以此方為研究對象，采用直接實驗設(shè)計法，對其進(jìn)行復(fù)方再優(yōu)化研究，然后，對再優(yōu)化所得最優(yōu)方進(jìn)行糖、脂雙降的藥效和機(jī)理探討。 1.文獻(xiàn)研究

3、 1．1 糖尿病合并高脂血癥與胰島素抵抗全面查閱了近年來國內(nèi)外糖尿病合并高脂血癥、胰島素抵抗及理論的相關(guān)研究文獻(xiàn)資料，闡明了胰島素抵抗為糖、脂代謝紊亂的共同病因，并對糖尿病合并高脂血癥胰島素抵抗的發(fā)病機(jī)理及研究方法進(jìn)行了系統(tǒng)的總結(jié)和綜述。 1．2 中藥復(fù)方再優(yōu)化研究進(jìn)展查閱整理了目前應(yīng)用于復(fù)方再優(yōu)化的主要實驗設(shè)計方法及數(shù)據(jù)優(yōu)化處理方法，掌握了相關(guān)項目科研的研究動念。 2．實驗研究 2．1 芪藍(lán)糖脂寧復(fù)方再

4、優(yōu)化試驗運用直接實驗設(shè)計法安排藥效實驗，獲得實驗信息，在前期復(fù)方再優(yōu)化理論研究的基礎(chǔ)上，結(jié)合專業(yè)知識，將藥味間的交互作用引入變量篩選過程，利用SAS軟件進(jìn)行多元線性回歸分析，得到針對不同效應(yīng)指標(biāo)的回歸方程，并預(yù)測出各指標(biāo)相應(yīng)的優(yōu)化方。依據(jù)傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論及各優(yōu)化方中藥味和藥量出現(xiàn)的頻次，擬合出最優(yōu)方——芪曲糖脂寧膠囊(QQTZN)。 篩選所得最優(yōu)方QQTZN由黃芪、葛根等五味中藥組成，藥味精良，且符合醫(yī)理藥理，功能益氣健脾，生津止

5、渴，化瘀降濁。 2．2最優(yōu)方藥效實驗驗證 采用高糖高脂飼料合并小劑量鏈脲佐菌素注射的方法復(fù)制2型糖尿病合并高脂血癥模型。在此基礎(chǔ)上觀察最優(yōu)方對模型大鼠糖、脂代謝以及胰腺和肝臟病理形態(tài)學(xué)改變。 綜上所述，最優(yōu)方藥少力專，糖脂雙調(diào)的藥效學(xué)作用確切，明顯優(yōu)于反證方，與理論預(yù)測結(jié)果一致，進(jìn)一步證實了復(fù)方再優(yōu)化方法對確有療效的中藥復(fù)方的篩選和精練處方的作用。結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)知識和中醫(yī)傳統(tǒng)理論，分析反證方的組方特點，可以看出數(shù)據(jù)

6、篩選剔除了部分滋陰及降脂作用相對較強(qiáng)而補(bǔ)氣和降糖作用相對較弱的中藥，從而達(dá)到精練處方的目的，使最優(yōu)方更突出了補(bǔ)氣健脾，化瘀降濁，進(jìn)而糖脂雙調(diào)的特點。 2．3機(jī)理探討 2．3．1對胰島素受體前水平影響 采用放射免疫技術(shù)研究了最優(yōu)方對模型大鼠血清胰島素含量的影響，結(jié)果表明，QQTZN高劑量組與模型組相比，血清胰島素水平明顯降低，胰島素敏感性指數(shù)明顯升高。中、低劑量組與模型組相比，血清胰島素水平無明顯變化，但胰島素敏感

7、性指數(shù)明顯升高。 采用免疫組化技術(shù)研究了最優(yōu)方對模型大鼠胰島α、β細(xì)胞胰島素、胰高糖素表達(dá)的影響。結(jié)果顯示，QQTZN高、中、低劑量組β細(xì)胞數(shù)量比模型組增多，胰島素表達(dá)較模型組明顯增強(qiáng)；α細(xì)胞數(shù)量比模型組減少，胰高血糖素表達(dá)較模型組明顯降低。 上述結(jié)果表明，QQTZN可以通過增加胰島素敏感性，修復(fù)鏈脲佐菌素(STZ)造成的胰島B細(xì)胞損傷，以及調(diào)節(jié)胰島Q細(xì)胞分泌胰高糖素水平來影響胰島素發(fā)揮正常的生物效應(yīng)。 2．3．

8、2對胰島素受體后PI-3K信號傳導(dǎo)途徑的影響 采用免疫組化技術(shù)研究了最優(yōu)方對肝臟組織IRS-2及PI-3K表達(dá)的影響。結(jié)果表明，最優(yōu)方高、中、低劑量組肝臟組織IRS-2表達(dá)較模型組明顯提高。QQTZN低劑量組與模型組相比PI-3K的表達(dá)有明顯提高，QQTZN高、中劑量組PI-3K表達(dá)與模型組相比有升高的趨勢，但無顯著差異。 采用RT-PCR產(chǎn)物半定量技術(shù)對實驗大鼠骨骼肌GluT4mRNA進(jìn)行了檢測，結(jié)果表明，QQTZN高

9、、低劑量組GluT4 mRNA表達(dá)與模型組相比有顯著升高。 從上述結(jié)果可以看出，QQTZN可以使IRS-2、PI-3K以及GluT4的表達(dá)有不同程度的提高，表明該藥可以從多個位點改善胰島素的信號傳導(dǎo)障礙，使胰島素得以發(fā)揮其正常的生理功能，調(diào)節(jié)糖、脂代謝。 2．3．3對PPARγ調(diào)控及其它脂肪源性細(xì)胞因子的影響 采用免疫組化技術(shù)研究了最優(yōu)方對肝臟組織PPARγ表達(dá)的影響。結(jié)果表明，與模型組相比，高、中劑量組有不同程

10、度的增加模型大鼠肝臟PPARγ表達(dá)的作用。 采用ELISA法檢測了最優(yōu)方對脂肪組織TNF-α表達(dá)的影響。結(jié)果顯示，QQTZN高、中劑量組有顯著降低脂肪中的TNF-α濃度的作用。提示最優(yōu)方可通過降低TNF-α水平，解除TNF-α對脂肪和肌肉GluT4表達(dá)抑制，刺激脂肪分解等作用提高胰島素敏感性。 采用比色法研究了最優(yōu)方對血清中FFA含量的影響。結(jié)果表明，QQTZN高、中、低劑量組均可顯著降低血清中FFA的含量。提示最優(yōu)方可

11、以通過降低脂毒性對機(jī)體的損害而達(dá)到調(diào)節(jié)糖、脂代謝的作用。上述結(jié)果表明，QQTZN可增加PPARγ表達(dá)，抑制TNF-α及FFA的釋放，調(diào)節(jié)脂代謝，而且可以通過抑制TNF-α、FFA的釋放，及改善胰島素信號傳導(dǎo)通路障礙等多條途徑增加胰島素的敏感性，從而對糖代謝進(jìn)行調(diào)節(jié)。 本課題的創(chuàng)新點在于： (1) 在張學(xué)中教授的指導(dǎo)下，將直接實驗設(shè)計法用于中藥有效復(fù)方的再優(yōu)化研究，在考察單味藥對藥效貢獻(xiàn)度的基礎(chǔ)上，根據(jù)中藥復(fù)方用藥的特點，

12、考慮了多味藥交互作用對藥效的貢獻(xiàn)度，更加符合中醫(yī)基礎(chǔ)理論及用藥規(guī)律。 (2) 本課題研究的是中藥復(fù)方對糖尿病合并高脂血癥的影響，發(fā)病機(jī)理存在糖代謝紊亂和脂代謝紊亂并存的現(xiàn)象，因此在機(jī)理探討方面，從二者的共同致病因素胰島素信號傳導(dǎo)通路障礙入手，同時考察了對脂肪源性細(xì)胞因子的影響，更好的解決了糖、脂共調(diào)的問題，為中藥干預(yù)糖、脂代謝的作用機(jī)理研究提供了新的思路。 綜上所述，通過本實驗研究，在原有效復(fù)方芪藍(lán)糖脂寧的基礎(chǔ)上凝煉出了