復(fù)方貞術(shù)調(diào)脂方對(duì)晝夜節(jié)律失調(diào)所致糖脂代謝紊亂小鼠模型的干預(yù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　本研究通過構(gòu)建晝夜節(jié)律失調(diào)所致糖脂代謝紊亂的小鼠模型，應(yīng)用“調(diào)肝啟樞化濁”理論代表方—復(fù)方貞術(shù)調(diào)脂方（FTZ）對(duì)該模型進(jìn)行干預(yù)，并探討其作用機(jī)制。
　　方法：
　　1、糖脂代謝紊亂小鼠模型的構(gòu)建。取6周齡左右C57BL/6J雄性小鼠104只，分為4組，即：空白組（CON，8只，白天光照，晚上黑暗）、24h小時(shí)光照組（24hL，36只，白天光照，晚上光照）、24h小時(shí)黑暗組(24hD，36只，白天黑暗，晚上黑

2、暗)、飲食和光照紊亂組（RFL，36只，白天黑暗，晚上光照）。CON、24hL、24hD組自由進(jìn)食；RFL組白天進(jìn)食，晚上禁食；持續(xù)時(shí)間12周。通過動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)小鼠白天/晚上進(jìn)食量、體重、糖代謝指標(biāo)（FBG、FINS、OGTT、ITT）、脂代謝指標(biāo)（TC、TG、HDL-C、LDL-C）判斷模型是否建立成功。
　　2、FTZ對(duì)糖脂代謝紊亂小鼠模型的干預(yù)作用及機(jī)制研究。取方法1中24hL、24hD、RFL組小鼠，每組又分為4小組，每小組8

3、只，即：對(duì)照組、羅格列酮組、FTZ高劑量組、FTZ低劑量組。一共為13組，給藥8周。動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)小鼠白天/晚上進(jìn)食量、體重；第9周測(cè)定小鼠糖、脂代謝指標(biāo)；第10周，根據(jù)Zeitgeber Time(開始光照時(shí)間記為ZT0)，各組別在ZTO(8：00am)、ZT6(2：00pm)、ZT12(8：00pm)、ZT18(2：00am)4個(gè)時(shí)間點(diǎn)（各2只）處死小鼠。取小鼠肝臟、附睪脂肪、腎周脂肪，計(jì)算小鼠肝臟指數(shù)、體脂比；測(cè)肝臟TC、TG含量；對(duì)小

4、鼠肝臟進(jìn)行組織固定，制作肝臟病理組織切片；提取肝臟總RNA，采用RT-PCR檢測(cè)肝臟時(shí)鐘基因mClock、mBmal1、mCry1以及糖脂代謝相關(guān)基因PPARγ的實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)的表達(dá)量。
　　結(jié)果：
　　1、經(jīng)過12周的造模，24hL、24hD、RFL組與 CON組比較，體重明顯增加（p<0.05）；小鼠飲食規(guī)律發(fā)生變化，白天/晚上進(jìn)食比例改變；24hL、24hD、RFL組TG、LDL-C、FBG、FINS均高于CON組（p<0.

5、05），24hL、24hD組TC水平較CON組高（p<0.05），但RFL組無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05），RFL組HDL-C水平與CON組相比明顯降低（p<0.05），而24hL、24hD組卻無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）；24hL、24hD、RFL組HOMA-IR和ISI與CON組相比明顯增高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；OGTT實(shí)驗(yàn)中，相同時(shí)間點(diǎn)的血糖濃度各組間無差異（p>0.05），但AUC顯示24hL、24hD組與CON組相比

6、明顯升高（p<0.05），RFL組無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05），24hL、24hD、RFL組的ITT實(shí)驗(yàn)AUC和CON組相比，明顯升高（p<0.05）。
　　2、經(jīng)過8周的藥物治療，F(xiàn)TZ略微降低小鼠的進(jìn)食量，小鼠體重有下降的趨勢(shì)（無顯著差異）；FTZ降低LCON、DCON、RCON組小鼠血清TC、LDL-C、FBG、FINS水平（p<0.05）；FTZ治療LCON、DCON、RCON組小鼠后，改善HOMA-IR、ISI、AUC（

7、ITT）（p<0.05），LCON、DCON、RCON組小鼠肝臟中TC、TG水平下降明顯，減輕體內(nèi)脂肪、體脂比、肝臟指數(shù)，且具有顯著性差異（p<0.05），不同程度的緩解LCON、DCON、RCON組小鼠肝臟組織病變。但FTZ降低LCON、DCON、RCON組小鼠血清TG、AUC（OGTT）以及升高LCON、DCON、RCON組小鼠血清HDL-C效果不明顯（p>0.05）。LCON、DCON、RCON組與CON組相比，肝臟組織中mBma

8、l1、mCry1和PPARγ基因總表達(dá)量升高或基因表達(dá)節(jié)律改變；FTZ能夠改善Cry1和PPARγ基因表達(dá)總量或者恢復(fù)其表達(dá)節(jié)律，F(xiàn)TZ對(duì)Bmal1基因表達(dá)節(jié)律性作用不明顯，但對(duì)振幅有一定的影響。
　　結(jié)論：
　　1、經(jīng)過12周改變小鼠光照或進(jìn)食時(shí)間，成功構(gòu)建晝夜節(jié)律失調(diào)所致糖脂代謝紊亂的小鼠模型。
　　2、模型小鼠經(jīng)過FTZ治療8周后，F(xiàn)TZ明顯改善小鼠糖脂代謝，其作用機(jī)制可能是恢復(fù)小鼠肝臟Cry1及PPARγ基因表