視交叉上核節(jié)律相關(guān)基因參與電針重置晝夜節(jié)律的作用研究.pdf

1、目的：通過對(duì)晝夜節(jié)律紊亂小鼠進(jìn)行電針治療，研究電針對(duì)節(jié)律的調(diào)整作用，以及節(jié)律紊亂小鼠視交叉上核（suprachiasmatic nucleus,SCN）內(nèi)多種節(jié)律相關(guān)基因及節(jié)律相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子參與電針重置晝夜節(jié)律的作用。
　　方法：采用成都中醫(yī)藥大學(xué)時(shí)間生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物自發(fā)活動(dòng)記錄及分析系統(tǒng)，以及Clocklab節(jié)律數(shù)據(jù)采集分析系統(tǒng)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行監(jiān)測(cè)和記錄。將經(jīng)過篩選的44只C57BL/6J近交系小鼠雄鼠分為：空白組（n=10）、模型

2、組（n=12）、電針組（n=10）、自然恢復(fù)組（n=12）四組。小鼠馴化時(shí)維持光暗交替(Light and Dark，LD)光照條件，即開燈時(shí)間設(shè)置為06：00~18：00，關(guān)燈時(shí)間為18：00~次日06：00，使實(shí)驗(yàn)室光照條件與外界環(huán)境同步?？瞻捉M小鼠維持馴化同步時(shí)光照條件，不予其他處理，20天后于ZT18（ZT：Zeitgeber time，為授時(shí)因子時(shí)間；本實(shí)驗(yàn)ZT0為06:00，ZT16即為22:00)時(shí)相點(diǎn)處死取材。模型組小鼠

3、LD馴化10天后開始造模，即進(jìn)行10天的超前性光暗周期轉(zhuǎn)移(advances of light/dark cycle)，10天后節(jié)律紊亂模型建立，造模成功后于ZT18時(shí)相點(diǎn)處死取材。自然恢復(fù)組及電針組小鼠LD馴化10天，節(jié)律同步后開始造模，造模10天后恢同步期光照條件。自然恢復(fù)組在造模結(jié)束后第1天至第3天于ZT16時(shí)相點(diǎn)進(jìn)行捆綁以平衡電針組因捆綁造成的刺激，電針組于造模結(jié)束后第1天至第3天于ZT16時(shí)相點(diǎn)進(jìn)行電針干預(yù)，選取“肝俞”和“至

4、陽”穴，電針設(shè)置：2/15Hz，0.2mA，電針15min，每天1次，連續(xù)電針3天。第三次電針結(jié)束后2h處死動(dòng)物并取材保存至-80℃冰箱。采用PCR Array高通量檢測(cè)方法檢測(cè)各組動(dòng)物SCN內(nèi)節(jié)律相關(guān)基因及部分節(jié)律相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子相對(duì)表達(dá)量。
　　結(jié)果：(1)電針重置晝夜節(jié)律結(jié)果：造模前各組動(dòng)物峰相位、起始活動(dòng)時(shí)間以及周期比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05)。造模后模型組、自然恢復(fù)組及電針組與造模前比較峰相位、起始活動(dòng)時(shí)間、周期均顯著

5、超前（P<0.05)。再同步時(shí)期，電針組電針干預(yù)后峰相位、起始活動(dòng)時(shí)間后移，與造模時(shí)及空白組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05)；電針組再同步第一天及第二天周期與空白組和造模前比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05)，再同步第三天與空白組和造模前比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。(2)電針影響視交叉上核節(jié)律相關(guān)基因結(jié)果：造模后模型組動(dòng)物SCN節(jié)律相關(guān)基因與空白組比較，模型組小鼠節(jié)律相關(guān)基因表達(dá)上調(diào)8個(gè)(Aanat、Crx、Epo、Nkx2-5、P

6、ax4、Prf1、Rora、Stat5a)，下調(diào)4個(gè)(Egr1、Per1、Per3、Prokr2)；自然恢復(fù)組與模型組比較上調(diào)3個(gè)基因(Esrra、Mat2a、Per3)，下調(diào)11個(gè)(Cartpt、Crx、Epo、Kcnma1、Mtnr1b、Nkx2-5、Nms、Pax4、Prf1、Prkacb、Prkca)；電針組與模型組比較，節(jié)律相關(guān)基因上調(diào)6個(gè)(Egr1、Esrra、Mat2a、Per1、Per3、Prokr2)，下調(diào)21個(gè)(Aa

7、nat、Arntl、Cartpt、Crx、Csnk1e、Epo、Kcnma1、Mtnr1b、Myod1、Nkx2-5、Nms、Opn3、Pax4、Prf1、Prkacb、Prkca、Prkcb、Prokr2、Rora、Rorb、Slc9a3、Tgfb1)。其中電針顯著影響基因4個(gè)，分別是：生物鐘基因：Per1；節(jié)律轉(zhuǎn)錄因子：Egr1；以及CREB信號(hào)：AANAT，Prokr2。Per1，Egr1，Prokr2造模后均表現(xiàn)為明顯下調(diào)，自然