LIPIN1在晝夜節(jié)律中的調(diào)節(jié)作用研究.pdf

1、晝夜節(jié)律是機體調(diào)節(jié)自身生理活動和行為來適應(yīng)環(huán)境的近24小時的周期性變化。晝夜節(jié)律的調(diào)節(jié)方式是由正調(diào)控元件和負調(diào)控元件組成的轉(zhuǎn)錄/翻譯負反饋環(huán)路。除此之外，晝夜節(jié)律還受到其他許多因素調(diào)控，其中最重要的一個因素就是能量代謝，但是能量代謝影響晝夜節(jié)律的分子機制尚不清楚。我們通過酵母雙雜交技術(shù)篩選發(fā)現(xiàn)LIPIN1與BMAL1分子之間存在相互作用。LIPIN1蛋白參與脂質(zhì)合成和能量代謝。本研究擬進一步研究LIPIN1在晝夜節(jié)律和能量代謝中的作用，

2、探討能量代謝影響晝夜節(jié)律的可能通路。
　　目的:闡明LIPIN1在晝夜節(jié)律中的作用;研究LIPIN1是否介導(dǎo)了能量代謝對晝夜節(jié)律的調(diào)節(jié)。
　　方法:通過免疫沉淀驗證LIPIN1和BMAL1的相互作用;通過GSTpull down的方法尋找LIPIN1與BMAL1，CLOCK相互作用的結(jié)合域;通過熒光素酶報告系統(tǒng)研究LIPIN1對BMAL1，CLOCK的功能的影響;通過構(gòu)建LIPIN1的突變體，檢測螢光素酶活性，尋找LIPIN

3、1對BMAL1，CLOCK的功能影響的結(jié)構(gòu)域;通過免疫熒光共定位尋找LIPIN1在細胞中發(fā)揮影響B(tài)MAL1，CLOCK功能的可能性原因的解釋。通過LIPIN1基因敲除小鼠的行為學(xué)實驗，研究LIPIN1對晝夜節(jié)律的作用;通過實時定量熒光PCR研究LIPIN1敲除后對時鐘基因表達的影響。
　　結(jié)果:LIPIN1與BMAL1、CLOCK之間存在相互作用， LIPIN1b的C端是其與BMAL1、CLOCK相互作用的重要結(jié)構(gòu)域。在小鼠肝臟中

4、，LIPIN1與BMAL1的相互作用具有晝夜節(jié)律性，在CT8-CT16最高。LIPIN1可以劑量依賴性地抑制CLOCK/BMAL1的轉(zhuǎn)錄活性。其可能的作用機制是促進BMAL1從細胞核轉(zhuǎn)移到細胞質(zhì)中。LIPIN1基因敲除小鼠肝臟中一些CLOCK/BMAL1靶基因表達的晝夜節(jié)律出現(xiàn)變化，主要表現(xiàn)為CT9的表達量比野生型小鼠高。白天進食可以逐步逆轉(zhuǎn)小鼠肝臟的節(jié)律基因表達，而這種改變在LIPIN1基因敲除小鼠中變緩。LIPIN1在果蠅神經(jīng)系統(tǒng)的