積雪草酸對(duì)高糖培養(yǎng)心肌細(xì)胞VDAC的表達(dá)及Ca2+超載的影響.pdf

1、目的:探討積雪草酸(asiatic acid,AA)對(duì)高糖環(huán)境中心肌細(xì)胞線粒體電壓依賴性陰離子通道(voltage-dependent anion channel,VDAC)的表達(dá)和Ca2+超載的影響。
　　 方法:
　　 (1)模型建立:胰酶消化法分離SD乳鼠原代心肌細(xì)胞,差速貼壁法提純。
　　 (2)實(shí)驗(yàn)分組:將培養(yǎng)72小時(shí)的SD乳鼠心肌細(xì)胞隨機(jī)分為三組:對(duì)照組(5mmol/L GS)、高糖培養(yǎng)組(25mmo

2、l/L GS)、高糖+AA組(25mmol/LGS+10、20、40、80nmol/L AA)。
　　 (3)檢測(cè)指標(biāo):
　　 ①倒置顯微鏡觀察心肌細(xì)胞生長(zhǎng)狀況記錄搏動(dòng)頻率;
　　 ②Western blot法檢測(cè)VDAC表達(dá)變化;
　　 ③WST法測(cè)定心肌細(xì)胞超氧化物歧化酶(SOD)活性;
　　 ④比色法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)丙二醛(MDA)含量;
　　 ⑤流式細(xì)胞儀檢測(cè)心肌細(xì)胞內(nèi)Ca2+含量。

3、r>　　 結(jié)果:
　　 1.心肌細(xì)胞搏動(dòng)頻率:NC、HG、HG+10nmol/LAA、HG+20nmol/LAA、HG+40nmol/LAA、HG+80nmol/LAA組心肌細(xì)胞搏動(dòng)頻率分別為(100.8±10.62)、(67.2±8.67)、(72.6±8.2)、(87.2±4.87)、(99.2±11.56)、(97.8±7.6),與對(duì)照組相比,高糖培養(yǎng)組心肌細(xì)胞搏動(dòng)頻率顯著降低(P＜0.05),加入不同濃度AA處理后,與

4、高糖組相比,除10nmol/L AA組差異無(wú)顯著性外,20nmol/LAA、40nmol/LAA、80nmol/L AA組細(xì)胞搏動(dòng)頻率均顯著升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),且40nmol/LAA組與80nmol/LAA組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 2.心肌細(xì)胞MDA含量變化:NC、HG、HG+10nmol/LAA、HG+20nmol/LAA、HG+40nmol/LAA、HG+80nmol/LAA組心肌

5、細(xì)胞內(nèi)MDA含量分別為(4.38±0.58)、(26.23±1.76)、(25.11±1.79)、(16.41±1.86)、(12.76±0.58)、(11.54±1.3),與對(duì)照組相比,高糖培養(yǎng)組心肌細(xì)胞MDA含量顯著升高(P＜0.05),加入不同濃度AA處理后,與高糖組相比,除10maaol/LAA組差異無(wú)顯著性外,20nmol/LAA、40nmol/LAA、80nmol/L AA組細(xì)胞內(nèi)MDA含量均顯著降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

6、＜0.05),且40nmol/L AA組與80nmol/LAA組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 3.心肌細(xì)胞內(nèi)SOD活性變化:NC、HG、HG+10nmol/LAA、HG+20nmol/LAA、HG+40nmol/LAA、HG+80nmol/LAA組心肌細(xì)胞SOD活性分別為(2.18±0.27)、(0.55±0.13)、(0.88±0.16)、(1.36±0.08)、(1.85±0.09)、(2.07±0.27),

7、與對(duì)照組相比,高糖培養(yǎng)組心肌細(xì)胞SOD活性顯著下降(P＜0.05),加入不同濃度AA處理后,與高糖組相比,除10nmol/LAA組差異無(wú)顯著性外,20nmol/LAA、40nmol/LAA、80nmol/AA組心肌細(xì)胞SOD活性顯著升高(P＜0.05),且40nmol/LAA組與80nmol/LAA組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 4.心肌細(xì)胞線粒體VDAC表達(dá)變化:NC、HG、HG+10nmol/LAA、HG+2

8、0nmol/LAA、HG+40nmol/LAA、HG+80nmol/LAA組心肌細(xì)胞線粒體VDAC表達(dá)量分別為(1.57±0.08)、(0.66±0.17)、(0.82±0.16)、(1.11±0.19)、(1.39±0.07)、(1.33±0.15),與對(duì)照組相比,高糖培養(yǎng)組VDAC表達(dá)量明顯降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);與高糖培組相比,除10nmol/L AA組差異無(wú)顯著性外,20nmol/LAA、40nmol/LAA、

9、80nmol/LAA組線粒體VDAC表達(dá)量均顯著升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),且40nmol/L AA組與80nmol/L AA組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 5.心肌細(xì)胞內(nèi)Ca2+離子含量變化:NC、HG、HG+10nmol/LAA、HG+20nmol/LAA、HG+40nmol/LAA、HG+80nmol/LAA組心肌細(xì)胞內(nèi)Ca2+含量分別為(9.24±0.83)、(28.46±0.96)、(27

10、.41±1.11)、(20.86±1.39)、(19.71±1.02)、(18.65±1.06),與對(duì)照組相比,高糖培養(yǎng)組心肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子熒光強(qiáng)度顯著升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);與高糖組相比,除10nmol/LAA組差異無(wú)顯著性外,20nmol/LAA、40nmol/L AA、80nmol/L AA組細(xì)胞內(nèi)鈣離子熒光強(qiáng)度均顯著降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),且40nmol/L AA組與80nmol/L AA組相比

11、差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 6.細(xì)胞內(nèi)MDA與線粒體VDAC及細(xì)胞內(nèi)Ca2+含量的直線相關(guān)關(guān)系:細(xì)胞內(nèi)MDA含量與線粒體VDAC表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.91,P＜0.05)而與細(xì)胞內(nèi)Ca2+含量呈正相關(guān)(r=0.95,P＜0.05)。
　　 7.細(xì)胞內(nèi)SOD活性與線粒體VDAC及細(xì)胞內(nèi)Ca+含量的直線相關(guān)關(guān)系:細(xì)胞內(nèi)SOD活性與線粒體VDAC表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.89,P＜0.05)而與細(xì)胞內(nèi)Ca2+含量呈