當(dāng)歸對缺糖缺氧培養(yǎng)心肌細(xì)胞保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：為觀察當(dāng)歸對缺糖缺氧損傷的體外培養(yǎng)心肌細(xì)胞的保護(hù)作用，建立缺糖缺氧心肌細(xì)胞損傷模型，通過生化檢測及組織化學(xué)和電鏡觀察等方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，初步探討了當(dāng)歸對體外培養(yǎng)心肌細(xì)胞的保護(hù)作用。
　　方法：將Wistar系大鼠乳鼠心肌細(xì)胞原代單層培養(yǎng)至5-7天，取生長良好的培養(yǎng)瓶隨機(jī)分為正常對照組、模型組、藥物對照組（人參皂甙）及實(shí)驗(yàn)組（當(dāng)歸，0.7mg/ml，0.5mg/ml，0.3mg/ml劑量，經(jīng)篩選0.5mg/ml為最適宜濃度）。

2、正常對照組：每隔三天更換培養(yǎng)液；模型對照組為N2飽和缺氧培養(yǎng)基培養(yǎng)；藥物對照組為N2飽和缺氧培養(yǎng)基加0.3mg/ml人參皂甙培養(yǎng)；實(shí)驗(yàn)組為 N2飽和缺氧培養(yǎng)基加0.5mg/ml當(dāng)歸提取物繼續(xù)培養(yǎng)。將各組均置于37℃二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)12小時(shí)，取出培養(yǎng)瓶內(nèi)生長細(xì)胞蓋玻片，采用組織化學(xué)、生化檢測及透射電鏡等方法觀察培養(yǎng)心肌細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化,超微結(jié)構(gòu)以及生化檢測數(shù)據(jù)的變化.
　　結(jié)果：組織化學(xué)觀察結(jié)果：正常對照組心肌細(xì)胞PAS反應(yīng)強(qiáng)，糖

3、原顆粒多,染色深；SDH活性較強(qiáng)，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)藍(lán)紫色顆粒較多，染色較深；ACP活性較弱，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)棕黃色顆粒較少，染色淺。模型對照組心肌細(xì)胞PAS反應(yīng)明顯減弱，糖原顆粒明顯減少，染色淺；SDH活性明顯減弱，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)藍(lán)紫色顆粒明顯減少，染色較淺；ACP活性明顯增強(qiáng)，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)棕黃色顆粒明顯增多，染色深。與模型對照組相比實(shí)驗(yàn)組及藥物對照組心肌細(xì)胞PAS反應(yīng)明顯增強(qiáng)，糖原顆粒明顯增多，染色較深；SDH活性明顯增強(qiáng)，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)藍(lán)紫色顆粒明顯增多，染色較深

4、；ACP活性減弱，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)棕黃色顆粒減少，染色較淺。
　　生化檢測結(jié)果：模型對照組 SOD活性較正常對照組明顯降低，MDA含量明顯升高,藥物對照組及實(shí)驗(yàn)組SOD活性較模型對照組明顯增強(qiáng)，MDA含量明顯降低（p＜0.01）
　　透射電鏡觀察結(jié)果:正常對照組各種細(xì)胞器結(jié)構(gòu)清晰，損傷組心肌細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，線粒體明顯變性、腫脹，嵴斷裂，雙層膜結(jié)構(gòu)不清，并見大量脂滴沉積，糖元顆粒明顯減少。但是，藥物組與藥物對照組的心肌細(xì)胞內(nèi)上述細(xì)胞損傷變化