GM-CSF與IL-21基因共轉(zhuǎn)染人卵巢癌細胞在裸鼠抗瘤效應(yīng)研究.pdf

1、一、GM-CSF與IL-21基因共轉(zhuǎn)染人卵巢癌細胞及其對NK細胞殺傷活性影響 目的：構(gòu)建小鼠粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)與白細胞介素21(1L-21)基因共表達載體pRSC-GM-CSF-IL21，將其轉(zhuǎn)染人卵巢癌細胞并觀察其對NK活性影響。 方法：利用PCR從本室先前構(gòu)建保存的重組質(zhì)粒pRSC-IL21中擴增出IL-21基因，再將其插入到另一重組pRSC-GM-CSF質(zhì)粒中，形成pRSC-GM-CSF-

2、lL21共表達質(zhì)粒(以酶切與測序鑒定)。用脂質(zhì)體將pRSC-GM-CSF-IL21以及pRSC-GM-CSF、oRSC-IL21與空質(zhì)粒pRSC分別轉(zhuǎn)染人卵巢癌細胞系SKOV3，并將各轉(zhuǎn)染的細胞依次命名為SKOV3/GM-CSF-IL21、SKOV3/GM-CSF、SKOV3/IL2l及SKOV3/Neo細胞。用RT-PCR檢測GM-CSF與IL-21表達，MTT法檢測細胞培養(yǎng)上清對小鼠脾細胞NK殺傷活性的影響。 結(jié)果：經(jīng)酶切與

3、測序鑒定pRSC-GM-CSF-IL21共表達質(zhì)粒構(gòu)建正確。SKOV3/GM-CSF、SKOV3/IL21、SKOV3/GM-CSF-IL21細胞中有相應(yīng)目的基因GM-CSF、lL-21的表達。與SKOV3/Neo及SKOV3細胞相比，SKOV3/GM-CSF、SKOV3/IL2l、SKOV3/GM-CSF-IL2l細胞上清能夠顯著增強小鼠脾細胞NK殺傷活性。 結(jié)論：成功構(gòu)建GM-CSF與lL-21基因共表達重組質(zhì)粒pRSC-G

4、M-CSF-1L21，并將其轉(zhuǎn)染卵巢癌細胞，表達的GM-CSF與IL-21能顯著增強小鼠脾細胞NK殺傷活性。 二． GM-CSF與IL-21基因共轉(zhuǎn)染人卵巢癌細胞在裸鼠體內(nèi)抗瘤效應(yīng)研究 目的：研究GM-CSF與IL-21基因共轉(zhuǎn)染人卵巢癌細胞系SKOV3后的體外影響及在裸鼠體內(nèi)的抗腫瘤效應(yīng)。 方法：體外分別培養(yǎng)SKOV3、SKOV3，Neo、SKOV3/GM-CSF、SKOV3/IL21及SKOV3/GM-CSF

5、-IL21細胞，用倒置相差顯微鏡、MTT比色法及流式細胞術(shù)(FCM)觀察各細胞生長增殖特性；FCM測定細胞表面人類白細胞抗原ABC(HLA-ABC)、MHC I類相關(guān)分子(MIC A/B)與細胞間粘附分子1(ICAM-1)的表達。將各細胞分別皮下接種BALB/c裸小鼠，監(jiān)測各組荷瘤鼠腫瘤生長情況，觀察GM-CSF與IL-21單獨及聯(lián)合誘導(dǎo)的抗腫瘤效應(yīng)。檢測荷瘤鼠外周血白細胞總數(shù)及中性粒細胞與單核細胞數(shù)，ELISA法檢測血清IFN-γ和T

6、NF-α含量，MTT比色法測定裸鼠脾細胞NK殺傷活性，RT-PCR檢測各組裸鼠脾細胞中NKG2D分子的表達。 結(jié)果：SKOV3、SKoV3/Neo、SKOV3/GM-CSF、SKOV3/IL21和SKOV3/GM-CSF-IL21細胞的形態(tài)、增殖凋亡特性、細胞周期及HLA-ABC表達無明顯變化；SKOV3/GM-CSF細胞能使ICAM-1表達升高；SKOV3/IL21和SKOV3/GM-CSF-IL21細胞使MIC A/B和IC

7、AM-1表達顯著升高。與SKOV3及SKOV3/Neo相比，SKOV3/GM-CSF、SKOV3/IL21和 SKOV3/GM-CSF-IL21組攻擊的裸鼠體內(nèi)腫瘤形成受到明顯抑制，其中SKOV3/GM-CSF-1L21組更明顯，與其它各組比較均有顯著差異；sKOV3/GM-CSF-IL21攻擊組裸鼠的外周血白細胞總數(shù)、中性粒細胞數(shù)、單核細胞數(shù)及1FN-γ和TNF-α含量均顯著升高，脾細胞NK殺傷活性及NKG2D表達均增強。 結(jié)