沉默ATF5對卵巢癌細(xì)胞skov-3裸鼠成瘤的研究.pdf

1、目的:分析慢病毒轉(zhuǎn)染沉默人轉(zhuǎn)錄激活因子5(Activating transcription factor5，ATF5)后，對卵巢癌SKOV-3細(xì)胞體外增殖、凋亡及體內(nèi)成瘤的影響，通過體外和體內(nèi)的實(shí)驗(yàn)研究來探討卵巢癌的基因治療，探索沉默ATF5的表達(dá)后，能否開辟卵巢癌治療的新方法。
　　方法:
　　1、慢病毒攜帶小于擾RNA，分別將構(gòu)建好的攜帶RNA干擾質(zhì)粒(沉默ATF5)和空載體的慢病毒感染生長良好的卵巢癌SKOV-3細(xì)胞和

2、卵巢癌SKOV-3細(xì)胞進(jìn)行對照，對比觀察細(xì)胞的生長狀態(tài)。
　　2、MTT法檢測細(xì)胞的增殖生長。
　　3、羅氏凋亡檢測試劑盒檢測細(xì)胞凋亡。
　　4、采用裸鼠皮下接種細(xì)胞的方法，于裸鼠皮下接種成瘤，觀察各組裸鼠的存活狀態(tài)、種植瘤生長情況，進(jìn)一步計(jì)算成瘤率。
　　5、RT-PCR檢測移植瘤ATF5 mRNA的表達(dá)情況。
　　6、Western-Blot檢測移植瘤ATF5蛋白的表達(dá)情況。
　　7、HE染色觀察

3、瘤組織組織學(xué)變化。
　　結(jié)果:
　　1、在體外培養(yǎng)條件下，SKOV-3的生物學(xué)形態(tài)沒有明顯差異。在相同培養(yǎng)時(shí)間內(nèi)細(xì)胞的增殖無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但RNA干擾的實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡數(shù)量較其他兩組明顯增多。
　　2、皮下接種成瘤后，三組裸鼠的成瘤率沒有明顯區(qū)別，但RNA干擾組腫瘤成瘤時(shí)間晚，生長緩慢。
　　3、移植瘤組織RT-PCR顯示RNA干擾組mRNA表達(dá)量與其他對照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);
　　4、瘤組