卷柏降糖活性篩選和主要有效成分改善胰島素抵抗作用的實驗研究.pdf

1、目的：采用HepG2細胞葡萄糖消耗模型探討卷柏的降糖作用以及降糖的活性部位；進一步研究主要有效成分體外降糖特點以及對胰島素抵抗是否有改善作用。 方法：首先采用HepG2細胞葡萄糖消耗實驗比較卷柏水提物及水提物上D101大孔吸附樹脂所得不同洗脫部位的降糖活性，篩選出降糖作用最佳部位，并結(jié)合卷柏HPLC色譜圖指認該部位主要成分。根據(jù)活性部位所含化合物的種類、性質(zhì)改進提取方法，結(jié)合HepG2細胞葡萄糖消耗實驗，與卷柏水提活性部位比較降

2、糖活性，采用HPLC色譜圖進行成分比對，確認提取方法和主要有效成分；檢測主要有效成分對HepG2細胞培養(yǎng)基中葡萄糖消耗作用；建立胰島素抵抗細胞模型，采用該細胞模型初步探討卷柏有效成分降糖的機理。 結(jié)果：(1)卷柏水提取物大孔吸附樹脂50％乙醇洗脫部位和70％乙醇回流提取物具有較高的降糖活性，結(jié)合建立的卷柏HPLC色譜圖，提示卷柏降糖作用為黃酮類化合物，穗花杉雙黃酮為主要的降糖活性成分。(2)在對穗花杉雙黃酮體外降糖活性實驗中發(fā)現(xiàn)

3、，中濃度葡萄糖(15.3mmol/L)培養(yǎng)基條件下10μg/ml穗花杉雙黃酮降糖作用最強，與胰島素同時用藥時具有明顯的協(xié)同降糖作用。(3)建立了穩(wěn)定可靠的胰島素抵抗HepG2細胞模型，即將HepG2細胞置于10-6mol·L-1的胰島素中48h，HepG2細胞對胰島素的作用產(chǎn)生抵抗，該特性可維持48h。(4)穗花杉雙黃酮劑量為10μg/ml時，能夠促進HepG2細胞胰島素抵抗模型的葡萄糖消耗，與胰島素具有一定的協(xié)同效應，并且在胰島素抵抗

4、細胞模型復制過程中，向培養(yǎng)基中加入劑量為10μg/ml穗花杉雙黃酮，細胞的葡萄糖消耗量明顯提高。 結(jié)論：由HepG2細胞葡萄糖消耗實驗結(jié)合卷柏HPLC圖譜色譜峰指認的結(jié)果，提示卷柏降糖作用的物質(zhì)基礎(chǔ)為黃酮類化合物，穗花杉雙黃酮為主要有效成分。穗花杉雙黃酮可通過肝細胞發(fā)揮降糖作用，在一定條件下可明顯地促進HepG2紐胞的基礎(chǔ)葡萄糖消耗、胰島素抵抗HepG2細胞葡萄糖消耗，增加胰島素的敏感性，提示對細胞水平的胰島素抵抗病理狀態(tài)的形成