“膽堿能抗炎通路”在小鼠病毒性心肌炎中保護(hù)性作用的研究.pdf

1、目的：大量研究顯示，激活α7煙堿型膽堿能受體(alpha7 nicotinic acetylcholinereceptor,α7 nAChR)依賴的“膽堿能抗炎通路”可以減少促炎細(xì)胞因子的合成與釋放，減輕炎癥反應(yīng)，改善疾病的預(yù)后?！澳憠A能抗炎通路”在膿毒血癥、內(nèi)毒素血癥、缺血再灌注損傷、慢性心力衰竭、出血性休克、急性胰腺炎等疾病中的保護(hù)性作用已得到證實。然而，“膽堿能抗炎通路”在病毒性心肌炎中的作用仍不得而知。本研究通過研究煙堿(Nic

2、otine，α7 nAChR的特異性激動劑)和甲基牛扁豆堿(Methyllycacotine，α7 nAChR的特異性阻斷劑)兩種藥物對柯薩奇病毒B3(CVB3)引起的急性病毒性心肌炎模型的作用，從激動和阻斷“膽堿能抗炎通路”兩個方面，探討“膽堿能抗炎通路”對小鼠病毒性心肌炎的作用及其相關(guān)機(jī)制。
　　方法：隨機(jī)將160只4周齡左右的雄性BALB/C小鼠分為4組:正常對照組(n=40)，心肌炎組(n=40)，煙堿組(n=40)，甲基

3、牛扁豆堿組(n=40)。后3組經(jīng)腹腔接種柯薩奇B3病毒(coxsackievirus B3，CVB3)誘發(fā)急性病毒性心肌炎，正常組腹腔注射磷酸緩沖液，接種當(dāng)天記為第0天，24h后煙堿組、甲基牛扁豆堿組每日分別給予腹腔注射煙堿(1.2mg/kg)、甲基牛扁豆堿(2.4mg/kg)，病毒組和正常組每日給予腹腔注射相同劑量的磷酸鹽緩沖液(Phosphate Buffered Saline，PBS)，直至第14天末，每組預(yù)留20只小鼠做生存率分

4、析，其余于接種第7天、14天隨機(jī)從各組抽取小鼠處死取心臟。對小鼠心肌行病理切片及HE染色觀察心肌組織的炎癥病理改變，計算病理評分，行電鏡檢查觀察心肌組織的超微結(jié)構(gòu)改變，行ELISA法檢測心肌組織炎癥因子IL-6、TNF-α的蛋白表達(dá)水平，行wB法檢測心肌組織的STAT及NF-kB等通路蛋白的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1.四組小鼠14天的生存分析:正常組未發(fā)現(xiàn)一只小鼠死亡，煙堿組生存率高于心肌炎組，甲基牛扁豆堿組生存率低于心

5、肌炎組。
　　2.四組小鼠心肌組織病理評分:煙堿組心肌病理損傷較心肌炎組減輕(p＜0.05)，而甲基牛扁豆堿組病理損傷較心肌炎組加重(p＜0.05)。
　　3.四組小鼠心肌組織的電鏡檢查:煙堿組心肌超微結(jié)構(gòu)損傷較心肌炎組減輕，而甲基牛扁豆堿組超微結(jié)構(gòu)損傷較心肌炎組加重。
　　4.四組小鼠的心肌組織炎癥因子的檢測:與正常組比較，煙堿組、心肌炎組、甲基牛扁豆堿組在第7天心肌組織IL-6、TNF-α的表達(dá)明顯升高(P＜0.0

6、5)，其中，煙堿組心肌組織IL-6、TNF-α的表達(dá)較心肌炎組下降(P＜0.05)，而甲基牛扁豆堿組心肌組織的IL-6、TNF-a的表達(dá)較心肌炎組明顯上調(diào)(P＜0.05);第14天時，四組無明顯差異(P＞0.05)。
　　5.四組小鼠通路蛋白的檢測:與正常組比較，煙堿組、心肌炎組、甲基牛扁豆堿組在第7天心肌組織的p-STAT3蛋白水平的表達(dá)明顯升高(P＜0.05)，其中煙堿組高于心肌炎組(P＜0.05)，甲基牛扁豆堿組低于心肌炎組

7、(P＜0.05);第14天時，四組無明顯差異。四組小鼠心肌組織的p-STAT1水平幾乎沒有表達(dá)，我們檢測不到。四組小鼠心肌組織的NF-κB P65在第7天、14天的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　6.p-STAT3、NF-κB和炎癥因子相關(guān)性分析:煙堿組、心肌炎組和甲基牛扁豆堿組小鼠7天時心肌組織中的p-STAT3的表達(dá)量與炎癥因子TNF-α、IL-6之間存在有統(tǒng)計學(xué)意義的負(fù)性相關(guān)關(guān)系(P＜0.05)，而NF-κB與炎癥

8、因子TNF-α、IL-6之間不存在線性關(guān)系(P＞0.05)。
　　結(jié)論：在病毒性心肌炎的急性期內(nèi)，煙堿通過激活“膽堿能抗炎通路”，增加STAT3蛋白的磷酸化，下調(diào)炎癥因子IL-6、TNF-α的表達(dá)，減輕心肌炎癥反應(yīng);甲基牛扁豆堿通過阻斷“膽堿能抗炎通路”，減少STAT3蛋白的磷酸化，上調(diào)炎癥因子IL-6、TNF-α的表達(dá)，加重心肌炎癥反應(yīng)。通過激動和阻斷α7AChR兩方面作用的比較，我們推測由a7nACh受體介導(dǎo)的“膽堿能抗炎通路