蟾毒靈對人肝癌細胞株增殖遷移侵襲黏附能力的影響及其機理研究.pdf

1、復旦大學碩士學位論文蟾毒靈對人肝癌細胞株增殖迀移侵襲黏附能力的影響及其機理研究Theeffectmechanismofbufalinontheproliferationmigrationinvasionadhesionofhumanhepatomacelllines院系:中山醫(yī)院專業(yè)：中西醫(yī)結(jié)合臨床(腫瘤方向)姓名：仇冬則導師:楊云柯副教授組成員：李立新副主任醫(yī)師王國驊主治醫(yī)師蟾毒靈對人肝癌細胞株增殖遷移侵襲黏附能力的影響及其機理研究摘

2、要研究背景原發(fā)性肝癌是我國常見惡性腫瘤，死亡率高，在惡性腫瘤導致死亡的原因中居第三位。相當多的肝癌發(fā)現(xiàn)時已是晚期，即使是接受根治手術(shù)的病人術(shù)后5年仍有30%至40%的復發(fā)率。晚期肝癌病人的中位生存時間為6到8個月，對于晚期肝癌的病人還沒有有效的治療方法。因而尋找肝癌治療的新靶點具有重要的臨床意義。研究發(fā)現(xiàn)我國臨床上常用的抗腫瘤中成藥蟾酥制劑的有效成分強心苷類物質(zhì)蟾毒靈（bufalin)具有抑制腫瘤細胞株增殖、誘導凋亡、逆轉(zhuǎn)耐藥細胞株耐藥

3、的作用，并發(fā)現(xiàn)bufalin可以抑制腫瘤細胞株Akt的磷酸化。Akt磷酸化后引起調(diào)節(jié)蛋白表達的改變在腫瘤的生長、增殖、凋亡、運動、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化、血管生成和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。而bufalin對人肝癌細胞株侵襲遷移的作用尚未見報道，預實驗研究表明bufalin可以抑制HCCLM3細胞株體外遷移，但其作用機理還不明了，其抑制腫瘤細胞遷移是否與抑制Akt磷酸化繼而影響下游調(diào)節(jié)蛋白的表達還有待研究，本實驗將從體外實驗探討bufalin對人肝癌細

4、胞株增殖、遷移、侵襲、黏附的影響及其與Akt信號通路關(guān)系，以期為蟾酥制劑的抗腫瘤作用尤其是抑制腫瘤侵襲方面提供實驗依據(jù)。研究目的本研究從體外實驗觀察bufalin對人肝癌細胞株HCCLM3、HepG2增殖、遷移、侵襲、黏附生物學行為的影響，并以Akt為靶點，研究bufalin對Akt信號通路相關(guān)蛋白Akt、pAkt(Ser473)、pGSK33(Ser9)、GSK3P、Pcatenin(Ser3337)、0catenin、Ecadher

5、in的表達及Pcatenin核易位的影響，探討bufalin對Akt—GSK3P一Pcatenin一Ecadherin信號通路的影響及其抑制腫瘤增殖、遷移、侵襲、黏附作用的機理。研究方法體外實驗評價bufalin對人肝癌細胞株HCCLM3、HepG2增殖、遷移、侵襲、黏附作用的影響。通過CCK8法評價bufalin對人肝癌細胞株的增殖抑制作用；劃痕實驗及Transwellmigration模型評價bufalin對人肝癌細胞株遷移能力影響

6、；Transwellinvasion模型評價bufalin對人肝癌細胞株侵襲能力的影響；黏附實驗觀察bufalin對人肝癌細胞株點附能力的影響。Westernbolt檢測Akt、pAkt(Ser473)、pGSK3P(Ser9)、GSK33、0catenin(Ser3337)、Pcatenin、Ecadherin的表達，細胞免疫熒光檢測0catenin核易位情況及Ecaherein的表達。結(jié)果1、Bufalin對人肝癌細胞株HCCLM3