shRNA抑制高爾基體α-甘露糖苷酶II基因的表達(dá)對胃癌細(xì)胞的侵襲力的影響及機(jī)制.pdf

1、目的:
　　初步研究分析，在中、低兩種分化人胃癌細(xì)胞系中，高爾基體α-甘露糖苷酶Ⅱ(GMⅡ)各自的差異表達(dá)，以探討GMⅡ在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　方法:
　　1.應(yīng)用陽離子脂質(zhì)體技術(shù)手法，將合成的GMⅡ靶向基因pGPU6/GFP/Neo-GMⅡ編號1406，分別同時轉(zhuǎn)染至低分化胃癌細(xì)胞MGC-803和中分化胃癌細(xì)胞SGC-7901中，并借助熒光倒置顯微鏡觀察熒光顯示并計(jì)算轉(zhuǎn)染率，最后經(jīng)過G418篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞

2、株。
　　2.利用Western-blot和RT-PCR檢測轉(zhuǎn)染以后兩株細(xì)胞中GMⅡ和E-cadherin、α-catenin蛋白及mRNA表達(dá)變化情況。
　　3.同時利用體外細(xì)胞劃痕試驗(yàn)和Transwell細(xì)胞小室侵襲實(shí)驗(yàn)來測定并比較GMⅡ被靶向沉默后，不同分化細(xì)胞及其對照組的侵襲能力。
　　結(jié)果:
　　GMⅡ shRNA轉(zhuǎn)染后胃癌MGC-803和SGC-7901細(xì)胞的GMⅡ的蛋白和mRNA表達(dá)明顯抑制，E-c

3、adherin和α-catenin的蛋白表達(dá)明顯升高(P＜0.05);細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，GMⅡ shRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組與其相應(yīng)對照組比較，沉默GMⅡ后兩種分化的胃癌細(xì)胞侵襲力都有所下降(P＜0.05)，Transwell細(xì)胞小室侵襲實(shí)驗(yàn):GMⅡ shRNA組胃癌細(xì)胞較空白對照組，陰性對照組(shNC)細(xì)胞侵襲能力都明顯降低，18h穿過Transwell的細(xì)胞數(shù)分別為:（65±5），（197±6），（186±5）;（72±4），（178