版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、ARHI是一種抑癌基因,該基因在卵巢,乳腺等組織中有高表達(dá),在很多正常組織中如心、腦、肝等器官中也有表達(dá)。但與之相反的是,在腫瘤細(xì)胞中ARHI的表達(dá)卻很低,如在乳腺癌、卵巢癌、胃癌等。這種改變可能與DNA甲基化、雜合丟失和組蛋白異常乙?;嘘P(guān)。但是ARHI在腎癌中的表達(dá)、作用和機制目前尚不明確。本次研究,我們通過細(xì)胞生物學(xué)和分子病理學(xué)方法探討ARHI基因?qū)δI癌增殖及凋亡的作用。
目的:檢測腎臟腫瘤細(xì)胞和正常腎組織中ARHI的表
2、達(dá),了解ARHI的表達(dá)與腎癌的臨床參數(shù)之間的相關(guān)性。檢測ARHI在腎癌細(xì)胞系中的表達(dá)情況,并建立ARHI再表達(dá)的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系。分析ARHI對腎癌細(xì)胞的增殖、凋亡的作用以及對細(xì)胞周期的影響。通過對相關(guān)信號通路的研究,探討ARHI在腎癌細(xì)胞中的作用機制。
材料和方法:我們選取了52例腎癌的臨床標(biāo)本,患者來源于中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院泌尿外科2009年1月至2013年12月就診的腎透明細(xì)胞癌病例。手術(shù)切除患腎及腫瘤,留取腫瘤組織和
3、癌旁正常腎組織標(biāo)本進(jìn)行研究。所有患者術(shù)后證實病理為腎透明細(xì)胞癌。通過RT-PCR和免疫印跡的方法檢測腫瘤細(xì)胞和對應(yīng)癌旁正常組織細(xì)胞的ARHI蛋白和mRNA的表達(dá)情況。搜集患者的年齡、性別、腫瘤大小、病理分級和TNM分期等資料,分析ARHI的表達(dá)與腎癌預(yù)后之間的關(guān)系。并根據(jù)患者的隨訪信息,繪制生存曲線圖。通過免疫組化的方法確定ARHI在腎癌中的表達(dá)位置。培養(yǎng)腎癌ACHN,OS-RC-2,786-O,769-P細(xì)胞系,利用RT-PCR和免疫
4、印跡的方法檢測ARHI在腎癌各細(xì)胞系中的表達(dá)情況。選取ARHI表達(dá)量較低的細(xì)胞系進(jìn)行進(jìn)一步的功能實驗。通過pcDNA3.1-ARHI質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的方法建立ARHI過表達(dá)的腎癌細(xì)胞系。將細(xì)胞分為轉(zhuǎn)染組,載體轉(zhuǎn)染組和未轉(zhuǎn)染組。通過MTT法檢測ARHI對腎癌細(xì)胞增殖率的影響。利用PI染色法檢測ARHI的表達(dá)對腎癌細(xì)胞周期的影響。通過PI/AnnexinⅤ雙染法,檢測各組細(xì)胞凋亡率的變化,從而說明ARHI對腎癌細(xì)胞凋亡的作用。最后,我們提取各組細(xì)胞
5、的核蛋白和胞漿蛋白,通過免疫印跡的方法檢測Wnt/β-catenin信號通路的相關(guān)蛋白表達(dá),包括LRP6,P-LRP6,Axin2,GSK-3β,以及胞核和胞漿內(nèi)的β-catenin,從而對ARHI的可能作用機制進(jìn)行分析和探討。
結(jié)果:我們對52例腎癌臨床標(biāo)本進(jìn)行了免疫印跡和RT-PCR檢測,發(fā)現(xiàn),腫瘤組織中ARHI的表達(dá)水平明顯低于癌旁正常腎組織。二者存在統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。免疫組化結(jié)果發(fā)現(xiàn),ARHI在腎臟細(xì)胞的表達(dá)
6、主要在胞漿中。將52例病人分為ARHI陽性組和ARHI陰性組,發(fā)現(xiàn)ARHI陽性組中位生存時間明顯高于ARHI陰性組。ARHI的表達(dá)與患者的年齡,性別,腫瘤大小,病理分級和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān),而與腫瘤的T分期和M分期有關(guān)。在各腎臟腫瘤細(xì)胞系A(chǔ)RHI的表達(dá)量均較低,且無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。我們選取亞裔來源的細(xì)胞系OS-RC-2進(jìn)行下階段實驗,經(jīng)過轉(zhuǎn)染后ARHI在OS-RC-2中的表達(dá)明顯升高,mRNA的表達(dá)量是未轉(zhuǎn)染組的8.05倍(P<
7、0.05),而空載體轉(zhuǎn)染組和未轉(zhuǎn)染組無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。通過MTT法檢測,pcDNA3.1-ARHI轉(zhuǎn)染的OS-RC-2細(xì)胞的增值率得到明顯的抑制,轉(zhuǎn)染組細(xì)胞增值率為未轉(zhuǎn)染組的0.46倍(P<0.05),未轉(zhuǎn)染組與空載轉(zhuǎn)染組和無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。各組OS-RC-2細(xì)胞通過AnnexinⅤ/PI雙染后,流式細(xì)胞儀對細(xì)胞的凋亡情況檢測。轉(zhuǎn)染組凋亡細(xì)胞數(shù)量明顯增加,是未轉(zhuǎn)染組的7.67倍(P<0.05)。而未轉(zhuǎn)染組與空載體
8、轉(zhuǎn)染組無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。通過PI染色后,流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測。轉(zhuǎn)染組中63.5%的細(xì)胞停留在G1期,未轉(zhuǎn)染組與空載轉(zhuǎn)染組G1期細(xì)胞比例為34.1%和32.8%。與之對應(yīng)的,轉(zhuǎn)染組G2期細(xì)胞比例僅為6.3%,而未轉(zhuǎn)染組與空載體轉(zhuǎn)染組G2期細(xì)胞比例分別為32.5%和36.4%。最后我們通過免疫印跡的方法對ARHI的作用機制進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)ARHI過表達(dá)后,OS-RC-2細(xì)胞胞漿和胞核內(nèi)的β-catenin的表達(dá)受到抑制,未轉(zhuǎn)染組和空
9、載體轉(zhuǎn)染組則沒有統(tǒng)計學(xué)差異。為了說明ARHI的作用機制,我們還檢測了與β-catenin信號通路相關(guān)的蛋白LRP6。轉(zhuǎn)染組LRP6及磷酸化LRP6的蛋白表達(dá)同樣得到抑制,而Axin2和GSK-3β的表達(dá)增加,上述結(jié)果與未轉(zhuǎn)染組和空載體轉(zhuǎn)染組相比均有統(tǒng)計學(xué)差異。
結(jié)論:在腎癌組織中,ARHI的表達(dá)比癌旁正常組織顯著下降,而且ARHI的表達(dá)情況與疾病的預(yù)后相關(guān)。在腎癌細(xì)胞中,ARHI的再表達(dá)可以抑制腫瘤細(xì)胞的增殖,減少細(xì)胞的有絲分
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- p120ctn-1和3亞型分別通過β-catenin及Kaiso途徑調(diào)控肺癌細(xì)胞增殖和周期.pdf
- 來氟米特對腎癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響.pdf
- NLK通過Notch和Wnt-β-catenin信號通路調(diào)控非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞增殖的分子機制研究.pdf
- Rock2通過β-catenin-TCF4信號通路調(diào)控SCARA5表達(dá)影響腎癌細(xì)胞增殖的研究.pdf
- MiR-634通過調(diào)控mTOR信號途徑抑制宮頸癌細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)凋亡的實驗研究.pdf
- RNA干擾沉默Ki67基因影響腎癌細(xì)胞增殖和凋亡研究.pdf
- miR-199靶向調(diào)控ROCK1影響腎癌細(xì)胞增殖、侵襲及凋亡的機制研究.pdf
- 肝細(xì)胞癌細(xì)胞凋亡與增殖及其相關(guān)調(diào)控因子的研究.pdf
- 雄激素受體通過抑制miR-145促進(jìn)腎癌細(xì)胞侵襲和增殖的機制研究.pdf
- miR-199a-3p通過抑制ZHX1的表達(dá)調(diào)控胃癌細(xì)胞增殖和凋亡的研究.pdf
- CCL21-CCR7調(diào)控肺癌細(xì)胞增殖和凋亡機制研究.pdf
- SSAT通過AKT-GSK-3β-β-catenin信號通路抑制肝癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲.pdf
- 蒺藜皂苷抑制腎癌細(xì)胞增殖的研究.pdf
- Rock2通過pGSK-3β-β-catenin信號通路調(diào)控CEBPD表達(dá)影響肝癌細(xì)胞增殖的研究.pdf
- ARHI基因?qū)σ认侔┘?xì)胞體外增殖、凋亡和侵襲轉(zhuǎn)移的影響及其相關(guān)機制研究.pdf
- 間充質(zhì)干細(xì)胞通過Wnt-β-catenin通路促進(jìn)人膽管癌細(xì)胞增殖、侵襲和耐藥的研究.pdf
- 環(huán)氧化酶-2抑制劑NS398對腎癌細(xì)胞增殖和凋亡的研究.pdf
- miR-502-5p通過調(diào)控TRAF2參與乳腺癌細(xì)胞凋亡與增殖.pdf
- CD40信號通過TNFRI途徑抑制肺癌細(xì)胞增殖的實驗研究.pdf
- MiR-34a通過Wnt-β-catenin信號通路影響神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖及凋亡.pdf
評論
0/150
提交評論