腎上腺皮質增生與腺瘤差異表達基因的篩選和研究.pdf

1、背景與目的： 原醛癥是繼發(fā)性高血壓的常見原因之一，最近應用血漿醛固酮濃度與腎素的比例作為在高血壓病人群中檢出原醛癥的篩查試驗中表明，在亞洲高血壓病人群中原醛癥的發(fā)病率至少為5％-13％；同樣的方法發(fā)現在歐洲高血壓病人群中原醛癥的發(fā)病率可到5％-25％。腎上腺皮質增生和腺瘤是原醛癥最常見的兩種亞型。腎上腺皮質腺瘤患者手術能治愈，而皮質增生需要以藥物治療為主結合手術且復發(fā)率較高。因此，鑒別腎上腺皮質增生和腺瘤對于臨床工作有重要的意義

2、。但是這兩種病變的臨床表現都是高血壓、高醛固酮血癥，低血鉀，當前我們只能靠一些實驗室的生化指標、影像學及術后標本的病理結果對兩種疾病進行鑒別。我們發(fā)現在病理上兩種病變存在很大差異，因此可以認為兩種病變的發(fā)生必然和不同基因的表達相關聯(lián)。隨著基礎實驗方法的飛速發(fā)展，特別是人類基因組計劃的全面完成，利用基因芯片技術尋找差異表達基因已經成為分子生物學的研究熱點之一。該技術具有高靈敏度、高特異性、及結果可靠、可重復性良好等特點，因此利用基因芯片技

3、術能迅速有效的分離、克隆腎上腺皮質增生和腺瘤組織之間的差異表達基因，這些基因對于了解疾病發(fā)生、發(fā)展分子生物學機制以及兩種疾病在臨床中診斷、鑒別診斷、治療等方面都有十分重要的意義，特別是在藥物及手術治療都不能有效控制腎上腺皮質增生病變的問題上開辟新的治療途徑，從而能有效的較少該病變的復發(fā)。 方法： 首先制備包含22k個基因的寡核苷酸基因芯片，分別提取腎上腺皮質增生和腺瘤及正常腎上腺組織的總RNA，然后將總RNA采用直接熒光

4、標記法逆轉錄成Cy5或Cy3標記的eDNA，腎上腺皮質增生和腺瘤及正常腎上腺組織的cDNA分別與基因芯片雜交，雜交后的芯片經過處理后ScanArray Express雙通道激光掃描儀進行掃描，得到雜交圖像，采用GenePix Pro 4.0圖像分析軟件對芯片圖像進行分析，把圖像信號轉化為數字信號，得出雜交信號數據，對數據用Lowess方法進行歸一化，最后以Radio≥2或≤0.5的標準來確定差異表達基因。本實驗在設計中是應用同一正常腎上

5、腺組織與兩種病變分別比較，因此可以認為兩種病變之間仍有可比性，能應用相同的方法篩選出腎上腺皮質增生和腺瘤之間的差異表達基因。 結果： 在本實驗中，腎上腺皮質腺瘤與正常腎上腺相比較共篩選出個333個差異表達基因，其中118個基因表達上調，215個基因表達下調；腎上腺皮質增生病變與正常腎上腺比較中共篩選出133個差異表達基因，其中49個基因表達上調，84個基因表達下調。通過計算機數據分析及文獻檢索，我們篩查出來部分腎上腺皮質

6、增生和腺瘤之間的差異表達基因，這些基因按照功能分類包括了抑癌基因、生長因子、細胞因子、受體等多種類型，這些基因在兩種病變的發(fā)生、發(fā)展中的作用機制有待進一步研究。 結論： 1．原發(fā)性醛固酮增多癥中腎上腺皮質增生和腺瘤相比存在較大的差異，通過以上方法能有效地篩選出原發(fā)性醛固酮增多癥中腎上腺皮質增生和腺瘤的差異表達基因。 2．對篩選出的差異表達基因進行計算機數據分析及文獻檢索，確定其身份及功能，例如：(1)STAR、C

7、YP11B、MCR2等基因在調節(jié)醛固酮的生成和分泌中發(fā)揮重要的作用；(2)KDR基因的表達與腫瘤內部血管的生長密切相關，而且通過免疫組化等方法對KDR基因的研究可能有助于在組織學上進一步區(qū)別腎上腺皮質增生和腺瘤。這些基因在原發(fā)性醛固酮增多癥中腎上腺皮質增生和腺瘤兩種亞型的發(fā)生、發(fā)展的作用機制及進一步在疾病的診斷、鑒別診斷、治療及預后分析的應用上都有重要的意義。 3．本研究所發(fā)現的差異表達基因片段為國內首次構建原發(fā)性醛固酮增多癥基