Egb761對(duì)慢性低氧培養(yǎng)小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞RAGE、LRP-1表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景：阿爾茨海默病(Alzheimer's Disease，AD)是老年人最常見的癡呆類型，嚴(yán)重危害老年人健康，但發(fā)病機(jī)制未明。AD的主要病理特征是β-淀粉樣蛋白(β-amyloid protein，Aβ)在腦內(nèi)聚集為老年斑(senile plaques，SPs)。對(duì)占AD絕大部分的散發(fā)性AD(sporadic Alzheimer disease，SAD)的病因?qū)W研究發(fā)現(xiàn)，Aβ清除減少是其腦內(nèi)Aβ聚集的主要原因。血腦屏障(blood

2、-brain barrier,BBB)是大腦清除Aβ的重要途徑，存在于BBB上的晚期糖基化終產(chǎn)物受體(receptor for advancedglycation end products,RAGE)和低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白-1(LDL receptor relatedprotein-1，LRP-1)是一對(duì)作用方向相反的Aβ跨BBB轉(zhuǎn)運(yùn)體，大腦對(duì)Aβ清除能力取決于兩者運(yùn)輸Aβ量的代數(shù)和。大量研究表明腦缺血，尤其是老年人普遍存在的腦慢性

3、低灌注與散發(fā)性AD強(qiáng)烈關(guān)聯(lián)，可以導(dǎo)致Aβ增加，但具體機(jī)制仍不清楚。同時(shí)，有研究表明全身低氧性疾病的患者AD發(fā)病率較正常人升高。Egb761是中醫(yī)常用的缺血腦保護(hù)藥，目前常被用作治療AD。因此研究慢性低氧對(duì)BBB上RAGE、LRP-1表達(dá)的影響對(duì)于明確Aβ增加的機(jī)制以及進(jìn)一步探討AD的病因有重要的意義。研究Egb761對(duì)慢性低氧狀態(tài)下BBB上RAGE、LRP-1表達(dá)的影響以進(jìn)一步探討Egb761治療AD的機(jī)制。
　　 目的：1.探

4、討慢性低氧對(duì)BBB上RAGE、LRP-1表達(dá)的影響。2.通過(guò)研究Egb761對(duì)慢性低氧BBB上RAGE、LRP-1的影響探討Egb761治療癡呆的可能機(jī)制。
　　 方法：將腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞系bEnd.3予低氧或/和Egb761(100ug/ml)干預(yù)24h、36h、48h，MTT法檢測(cè)低氧或/和Egb761對(duì)腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞活力的影響，RT-PCR測(cè)定RAGE、LRP-1mRNA的表達(dá)，Western blot檢測(cè)RAGE、LR

5、P-1蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果：1.Egb761對(duì)慢性低氧培養(yǎng)bEnd.3細(xì)胞活力的影響：低氧培養(yǎng)24h、36h、48h組較正常培養(yǎng)對(duì)照組細(xì)胞活力降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，Egb761對(duì)低氧培養(yǎng)bEnd.3細(xì)胞具有保護(hù)作用。2.Egb761對(duì)慢性低氧培養(yǎng)bEnd.3細(xì)胞RAGE、LRP-1mRNA水平表達(dá)的影響：低氧培養(yǎng)24h后，RAGE mRNA表達(dá)低于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，低氧24h、36

6、h、48h組RAGE mRNA表達(dá)呈時(shí)間依賴性增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，低氧各組LRP-1 mRNA表達(dá)較正常對(duì)照組呈時(shí)間依賴性降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。而Egb761干預(yù)低氧培養(yǎng)組與低氧培養(yǎng)組相比，三個(gè)時(shí)段bEnd.3細(xì)胞RAGE mRNA表達(dá)均降低，48h時(shí)幾乎不表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，Egb761干預(yù)低氧培養(yǎng)24h及36h組LRP-1mRNA表達(dá)與低氧培養(yǎng)組相比增高，48h時(shí)下降，差異有

7、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。3.Egb761對(duì)慢性低氧培養(yǎng)bEnd.3細(xì)胞RAGE、LRP-1蛋白水平表達(dá)的影響：低氧培養(yǎng)24h組RAGE蛋白表達(dá)低于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，低氧24h、36h、48h組RAGE蛋白表達(dá)呈時(shí)間依賴性增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，三時(shí)間點(diǎn)LRP-1蛋白的表達(dá)呈時(shí)間依賴性降低，而Egb761干預(yù)低氧培養(yǎng)組與低氧培養(yǎng)組相比，三個(gè)時(shí)段bEnd.3細(xì)胞RAGE蛋白表達(dá)均降低，而24h

8、、36h LRP-1蛋白表達(dá)增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：1.慢性低氧培養(yǎng)降低bEnd.3細(xì)胞活力，而Egb761對(duì)慢性低氧培養(yǎng)bEnd.3細(xì)胞有保護(hù)作用。2.慢性低氧培養(yǎng)增加bEnd.3細(xì)胞RAGE mRNA及蛋白表達(dá)，降低LRP-1 mRNA及蛋白表達(dá)，可能因此增加Aβ入腦轉(zhuǎn)運(yùn)，減少向腦外的清除，導(dǎo)致腦內(nèi)Aβ水平增加。3.Egb761可部分逆轉(zhuǎn)慢性低氧狀態(tài)下RAGE、LRP-1的表達(dá)，可能有利于Aβ清