NF-κB通路與Fractalkine在RA成纖維樣滑膜細(xì)胞增殖中的作用研究.pdf

1、背景：
　　 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)是一種以關(guān)節(jié)滑膜為主要靶組織的慢性系統(tǒng)性炎癥性疾病?；ぱ装Y細(xì)胞浸潤(rùn)以及襯里層增生是其典型病理表現(xiàn)。增生的襯里層主要由巨噬細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞和成纖維細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞(FLS)組成。RA-FLS是滑膜中特殊的細(xì)胞群，RA發(fā)病后，其發(fā)生了腫瘤樣的改變，表現(xiàn)為具有逃脫接觸抑制的能力，自主增殖程度增高，有侵襲的內(nèi)在特性。RA-FLS在RA的發(fā)病中起重要作用，而目前有關(guān)其生物學(xué)特性及變化機(jī)制不明。RA-FLS可

2、分泌多種細(xì)胞因子，如生長(zhǎng)因子、趨化因子等。在RA的慢性炎癥反應(yīng)中，這些細(xì)胞因子是否在RA-FLS生物學(xué)特性改變中起作用及如何起作用尚不明確。RA-FLS分泌的一種細(xì)胞因子——Fractalkine(FKN)，又稱CX3CL1，有研究顯示其在細(xì)胞的增殖中有重要作用，此因子可能參與到RA-FLS的自主增殖過(guò)程中。在動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞中，F(xiàn)KN可通過(guò)NF-κB信號(hào)通路導(dǎo)致細(xì)胞增殖，NF-κB的活化也可增加FKN的表達(dá)。以往的研究發(fā)現(xiàn)，NF-κB可

3、與細(xì)胞因子構(gòu)成反饋機(jī)制，即許多細(xì)胞因子可激活NF-κB，同時(shí)部分細(xì)胞因子的激活又受到NF-κB的轉(zhuǎn)錄調(diào)控。這一反饋機(jī)制可導(dǎo)致RA炎癥反應(yīng)和結(jié)構(gòu)破壞得以維持與發(fā)展，這種反饋機(jī)制也可能存在NF-κB與FKN之間。在RA關(guān)節(jié)滑液中存在高滴度的FKN，RA-FLS中是否存在FKN-CX3CR1自分泌正反饋現(xiàn)象，是否存在FKN-CX3CR1對(duì)NF-κB的激活作用及NF-κB激活后對(duì)FKN的反饋?zhàn)饔?，這種相互作用對(duì)RA-FLS異常增殖是否產(chǎn)生影響值

4、得研究。
　　 目的：
　　 研究RA-FLS中NF-κB通路與FKN-CX3CR1自分泌的相互關(guān)系，及該關(guān)系在RA-FLS自主增殖中的作用。
　　 材料和方法：
　　 收集行關(guān)節(jié)置換術(shù)的RA患者滑膜標(biāo)本，共6例。隨機(jī)選取其中3例培養(yǎng)至第三代，用不同濃度外源FKN且加或不加NF-κB抑制劑(PDTC)進(jìn)行作用，24h后MTT法檢測(cè)RA-FLS的增殖率；用100ng/mlFKN或100μMPDTC刺激RA-

5、FLS不同時(shí)間后，RT-PCR檢測(cè)其自身FKN和CX3CR1mRNA表達(dá)；用100ng/mlFKN刺激RA-FLS不同時(shí)間后，western blotting檢測(cè)其胞漿及胞核內(nèi)NF-κBp65(NF-κB成員之一，NF-κB活化后NF-κBp65可從胞漿轉(zhuǎn)移至核內(nèi))的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 加入FKN后，50ng/ml組與100ng/ml組的增殖率均值較對(duì)照組(0ng/ml FKN)升高(P＜0.01，P＜0.05)

6、，但兩組間增殖率比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；同時(shí)加入FKN和PDTC，F(xiàn)KN0ng/ml+PDTC100μM組較對(duì)照組(FKN0ng/ml+PDTC0μM)降低(P＜0.05)，F(xiàn)KN100ng/ml+PDTC100μM較FKN0ng/ml+PDTC100μM組增殖率升高(P＜0.05)；在離體培養(yǎng)的RA-FLS中可表達(dá)FKN和CX3CR1，加入FKN作用，18h組FKNmRNA表達(dá)量高于對(duì)照組(0h)(P＜0.05)，CX3CR1實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組

7、(0h)比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；加入PDTC后，16h及18h組FKNmRNA表達(dá)量較對(duì)照組(0h)減少(均為P＜0.01)，CX3CR1表達(dá)量實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組(0h)比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；加入100ng/mlFKN，1h組胞漿中NF-κBp65蛋白表達(dá)量較對(duì)照組(0h)降低(P＜0.05)，2h組胞核內(nèi)NF-κBp65蛋白表達(dá)量較對(duì)照組(0h)升高(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 外源FKN可刺激體外RA-FLS增殖，5

8、0ng/ml～100ng/ml濃度未成濃度依賴性。RA-FLS可自表達(dá)FKN及其受體CX3CR1mRNA，外源FKN可刺激RA-FLS自身的FKNmRNA表達(dá)上升，提示RA-FLS中可能存在FKN的自表達(dá)和正反饋現(xiàn)象。FKN可激活RA-FLS中NF-κB通路，應(yīng)用NF-κB通路的抑制劑(PDTC)作用后，F(xiàn)KNmRNA的表達(dá)下降，且PDTC與FKN對(duì)RA-FLS增殖的作用相反，提示FKN對(duì)RA-FLS的促增殖以及促自身FKN分泌的作用，