T-614對人RA成纖維樣滑膜細(xì)胞TNF-α產(chǎn)生的抑制作用.pdf

1、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)是一種以侵襲性關(guān)節(jié)炎為主要表現(xiàn)的全身性自身免疫病。本病以女性多發(fā)，男女患病比例約1∶3。RA可發(fā)生于任何年齡，以30-50歲為發(fā)病的高峰。我國大陸地區(qū)的RA患病率為0.2-0.4％。由于本病的病因及發(fā)病機制未完全明確，目前臨床上尚缺乏根治及預(yù)防本病的有效措施。RA治療的目的在于減輕關(guān)節(jié)癥狀、緩解病情進展、防止和減少關(guān)節(jié)的破壞、保護關(guān)節(jié)功能、最大限度提高患者的生活質(zhì)量。應(yīng)強調(diào)早

2、期診斷、早期治療、聯(lián)合用藥和個體化治療的原則。治療方法包括一般治療、藥物治療、外科手術(shù)治療，其中以藥物治療最為重要。T-614，是一種新型免疫調(diào)節(jié)劑，能夠抑制炎癥因子的產(chǎn)生，減輕關(guān)節(jié)炎癥及關(guān)節(jié)損傷。目前，對T-614炎癥抑制作用的研究主要停留在動物模型水平，而對RA患者離體滑膜細(xì)胞的炎癥抑制作用的研究尚缺乏直接證據(jù)。
　　第一部分篩選患者入組及采集標(biāo)本
　　目的:篩選活動性類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者入組及采集滑膜標(biāo)本
　　方法:

3、
　　1.篩選患者入組:
　　A.納入病例標(biāo)準(zhǔn)
　　(1)診斷符合2010年ACR/EULAR分類標(biāo)準(zhǔn)
　　(2)年齡≥18歲
　　B.排除病例標(biāo)準(zhǔn)
　　(1)不符合以上診斷標(biāo)準(zhǔn)者
　　(2)妊娠或準(zhǔn)備懷孕的女性，或哺乳期女性
　　(3)嚴(yán)重的心、肝、腎功能異常（超過正常值上限的1.5倍）
　　(4)有酗酒史者
　　(5)有惡性腫瘤者
　　(6)對T-614有過敏史的患者

4、
　　(7)參加任何臨床藥物試驗的患者
　　2.采集標(biāo)本:采集符合上述標(biāo)準(zhǔn)并行滑膜切除術(shù)治療的患者的滑膜組織。
　　結(jié)果:
　　1.選取5例符合標(biāo)準(zhǔn)的患者入組。
　　2.采集上述患者病變部位滑膜組織。
　　結(jié)論:成功篩選了活動性類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者入組及獲取了RA患者病變部位滑膜組織。
　　第二部分離體滑膜細(xì)胞培養(yǎng)及鑒定
　　目的:研究類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細(xì)胞體外培養(yǎng)方法及鑒定方法

5、　　方法:
　　1.用Ⅰ型膠原酶體外培養(yǎng)法，對5例類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者滑膜細(xì)胞組織標(biāo)本進行原代培養(yǎng)及傳代培養(yǎng)，觀察培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞形態(tài)及細(xì)胞增殖情況。
　　2.原代細(xì)胞傳代培養(yǎng)至3-4代時，應(yīng)用細(xì)胞免疫組織化學(xué)染色方法，檢測Vimentin及CD68表達水平，鑒定滑膜細(xì)胞類型。
　　結(jié)果:
　　1.成功培養(yǎng)了5例RA患者滑膜細(xì)胞。
　　2.成纖維樣滑膜細(xì)胞表現(xiàn)為Vimentin染色陽性，CD68染色陰性。

6、>　　結(jié)論:成功獲得了RA患者成纖維樣滑膜細(xì)胞。
　　第三部分 T-614抑制TNF-a產(chǎn)生
　　目的:研究T-614對TNF-a的作用
　　方法:
　　1.將細(xì)胞分為4組，分別為:對照組、MTX組、T-614組和兩藥聯(lián)用組。應(yīng)用蛋白免疫印跡法(western blot)檢測4組細(xì)胞內(nèi)TNF-a蛋白表達水平。
　　2.對上述4組，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測4組細(xì)胞外TNF-a分泌水平。