三氧化二砷對TNF-α誘導(dǎo)的人類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細(xì)胞Ras-p38 MAPK通路的調(diào)控研究.pdf

1、 目的：
1.觀察TNF-α對RA FLS的Ras-p38MAPK信號通路活化水平的影響。2.觀察不同濃度的ATO對TNF-α誘導(dǎo)的Ras-p38 MAPK信號通路活化水平的影響。
方法：
1.從 RA 患者的膝關(guān)節(jié)腔積液中獲取標(biāo)本進(jìn)行原代培養(yǎng) RA FLS 細(xì)胞。培養(yǎng)至第3代即獲得純化的RA FLS細(xì)胞。
2.使用 10μg/L 的 TNF-α 與第 3 代 RA FLS 共孵

2、育 30min,運(yùn)用Western-blot檢測其與空白對照組的Ras、p-p38的表達(dá)水平。
3.將三種不同濃度的ATO(0.5μmol/L、5μmol/L 、25μmol/L)與RA FLS細(xì)胞共孵育24h,然后終止反應(yīng),將10μg/L TNF-α與之共孵育30min ,終止反應(yīng)進(jìn)行Western blot檢測每個(gè)組的Ras、p-p38的表達(dá)水平。
結(jié)果：
1.原代培養(yǎng)有較多的巨噬細(xì)胞,隨著

3、傳代的進(jìn)行,其逐漸被去除。到第三代培養(yǎng)的細(xì)胞基本上都是RA FLS細(xì)胞。
2.TNF-α刺激后的RA FLS,通過Western blot檢測表明Ras, p-p38表達(dá)水平明顯升高。(p<0.05)
3.相對于 TNF-α 誘導(dǎo)組,ATO 組能夠降低 TNF-α 誘導(dǎo) RA FLS 的Ras-p38 MAPK通路活化時(shí)Ras、p-p38的表達(dá)水平,這種抑制作用呈劑量依耐性。(p<0.05)
結(jié)