2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、背景:類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis, RA)RA的病理特征主要表現(xiàn)為滑膜細胞的增殖與炎性細胞的浸潤,導(dǎo)致滑膜增厚、骨與軟骨組織的侵蝕破壞。越來越多的研究表明,RA滑膜成纖維細胞(rheumatoid arthritis synovial fibroblasts, RASFs)的凋亡缺陷是其重要發(fā)病機制之一。因此誘導(dǎo)RASFs凋亡、抑制滑膜組織增殖成為治療RA的關(guān)鍵。腫瘤壞死因子相關(guān)的凋亡誘導(dǎo)配體(TNF-rel

2、ated apoptosis inducing ligand, TRAIL)是近年來新發(fā)現(xiàn)的凋亡誘導(dǎo)配體,它具有強大的誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡的能力,但對正常細胞基本沒有影響。有研究發(fā)現(xiàn),在IL-1β誘導(dǎo)的兔膝骨關(guān)節(jié)炎模型中,通過對兔關(guān)節(jié)腔內(nèi)注入帶有TRAIL基因的腺病毒可使TRAIL介導(dǎo)的炎性滑膜組織凋亡率升高。本實驗擬通過重組人腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(human TNF-related apoptosis inducing ligan

3、d,hTRAIL)蛋白體外誘導(dǎo)RASFs的凋亡,以期尋找RA新的治療方法。
  目的:探討重組hTRAIL蛋白對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細胞(RASFs)凋亡的作用。
  方法:
  1.獲取類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的滑膜組織,用酶消化法分離培養(yǎng)原代滑膜細胞。
  2.滑膜細胞的鑒定:滑膜細胞傳至第4代,倒置顯微鏡下觀察滑膜細胞形態(tài), II型膠原鑒定滑膜成纖維細胞。
  3.細胞增殖實驗:不同終濃度hTRAIL干預(yù)滑

4、膜細胞,繼續(xù)培養(yǎng)不同時間后, MTT法檢測其對滑膜細胞增殖的抑制作用。
  4.流式細胞術(shù):設(shè)對照組(僅加培養(yǎng)基)和加藥組(加入含不同濃度hTRAIL的含藥培養(yǎng)基),干預(yù)對數(shù)生長期細胞4小時后,收集細胞,上機檢測滑膜細胞的凋亡情況。實驗重復(fù)三次取平均值。
  5. RT-PCR:設(shè)對照組(僅加培養(yǎng)基)和加藥組(加入含不同濃度hTRAIL的含藥培養(yǎng)基),干預(yù)對數(shù)生長期細胞4小時后,進行逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈(RT-PCR)反應(yīng),軟件

5、分析結(jié)果。實驗重復(fù)三次,取平均值。
  6. Western bloting:hTRAIL干預(yù)對數(shù)生長期細胞4小時后,進行Western bloting實驗,用凝膠圖像處理系統(tǒng)分析實驗結(jié)果。實驗重復(fù)三次,取平均值。
  結(jié)果:
  1. hTRAIL對滑膜細胞生長的影響:用不同濃度的hTRAIL處理滑膜細胞4h、12h、24h、48h后,表現(xiàn)出不同程度的細胞生長抑制作用,各組與對照組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01

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