苦參素對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠的治療作用及部分作用機(jī)制的研究.pdf

1、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是一種病因未明、以關(guān)節(jié)破壞為主的慢性致殘性自身免疫病。RA的本質(zhì)是慢性滑膜炎導(dǎo)致的關(guān)節(jié)軟骨/骨質(zhì)破壞,關(guān)節(jié)破壞是RA致殘的主要原因。RA的病理基礎(chǔ)是滑膜炎,炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)是重要的病理改變。巨噬細(xì)胞在炎癥反應(yīng)過程起著十分重要的作用。在局部或全身炎癥反應(yīng)過程中,巨噬細(xì)胞活化,可以分泌各種細(xì)胞因子,如白細(xì)胞介素1(interleukin-l,IL-1)、腫瘤壞死因子-α(tumor

2、necrosis factor-α,TNF-α)、白細(xì)胞介素6(interleukin-l,IL-6)及基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMPs)等。Toll樣受體4(Tol1-1ike receptor4,TLR4)主要表達(dá)于除T、B細(xì)胞和NK細(xì)胞以外的各類免疫細(xì)胞的表面,其介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路可能在自身免疫性疾病中發(fā)揮重要的作用,佐劑性關(guān)節(jié)炎(adjuvant arthritis,AA)模型大鼠腹腔

3、巨噬細(xì)胞功能的異常改變可能與TLR4信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的異常改變有關(guān)。
　　本研究在建立AA大鼠模型的基礎(chǔ)上,觀察苦參素(oxymatrine,OM)對(duì)AA大鼠的治療作用,及對(duì)AA大鼠腹腔巨噬細(xì)胞(peritoneal macrophages,PMΦ)異常功能變化的影響,并探討OM作用的部分作用機(jī)制,為進(jìn)一步研究能有效治療RA的藥物提供理論依據(jù)和研究基礎(chǔ)。
　　目的:本研究主要觀察OM對(duì)AA大鼠炎癥的治療作用,探討OM對(duì)大鼠AA狀

4、態(tài)下腹腔巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的炎癥細(xì)胞因子、TLR4信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響,闡明OM調(diào)節(jié)AA大鼠抗炎免疫活性及部分作用機(jī)制。
　　方法:大鼠左足跖皮內(nèi)注射弗氏完全佐劑(Frond’s completed Adjuvant,FCA),誘發(fā)大鼠AA模型,以O(shè)M30、60、120mg·kg-1(ig,d13~d24)治療給藥,雷公藤多苷(gtueosides of tripterygium wifordii,TPT)作陽性對(duì)照(30mg·kg-1i

5、g,d13~d24)。以大鼠繼發(fā)側(cè)足爪腫脹度(m1)關(guān)節(jié)腫脹度、多發(fā)性關(guān)節(jié)炎指數(shù)、體重等改變?cè)u(píng)價(jià)OM對(duì)AA大鼠的保護(hù)作用,HE染色觀察各組大鼠關(guān)節(jié)病理學(xué)變化;放免法測(cè)血清IL-1β、TNF-α的水平;體外以不同濃度OM刺激大鼠PMΦ, ELISA法測(cè)定大鼠腹腔巨噬細(xì)胞(PMΦ)釋放IL-1β、TNF-α水平,Western blot檢測(cè)PMΦTLR4、NF-κB的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:1.OM對(duì)AA大鼠具有治療作用：
　　A

6、A模型組在致炎后d12、d16、d20、d24,繼發(fā)側(cè)足腫脹度與正常組比較明顯增加。OM(60,120mg·kg-1,ig,d12~d23)體內(nèi)給藥可不同程度減輕AA大鼠的繼發(fā)性足腫脹,改善關(guān)節(jié)炎癥癥狀,降低血清IL-1β、TNF-α水平,提示OM可調(diào)節(jié)AA大鼠異常的免疫功能,抑制細(xì)胞因子的釋放,表明OM對(duì)AA大鼠具有治療作用。
　　2.OM治療AA大鼠可能與抑制AA大鼠巨噬細(xì)胞功能有關(guān)：
　　AA大鼠腹腔巨噬細(xì)胞中IL-1

7、β、TNF-α的生成明顯高于正常組。體外給藥OM(1.0×10-8、1.0×10-7mol·L-1)與AA組比較,對(duì)IL-lβ及TNF-α的生成,沒有明顯改變;OM(1.0×10-6、1.0×10-5、1.0×10-4 mol·L-1)可不同程度降低PMΦ分泌IL-lβ、TNF-α水平。通過抑制巨噬細(xì)胞分泌炎性細(xì)胞因子,調(diào)節(jié)AA大鼠免疫功能可能是OM發(fā)揮作用的重要途徑之一。
　　3. OM影響AA大鼠腹腔巨噬細(xì)胞可能與TLR4、N

8、F-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路：
　　為進(jìn)一步探討OM對(duì)大鼠腹腔巨噬細(xì)胞TLR4信號(hào)傳導(dǎo)通路的影響,對(duì)OM(1.0×10-6、1.0×10-5、1.0×10-4 mol·L-1)體外給藥后大鼠腹腔巨噬細(xì)胞TLR4、NF-κB蛋白表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果表明,AA大鼠腹腔巨噬細(xì)胞中TLR4、NF-κB表達(dá)較正常組大鼠升高,而OM(1.0×10-5、1.0×10-4 mol·L-1)可明顯下調(diào)TLR4、NF-κB的表達(dá)。提示:TLR4和NF-κB