制附子干預(yù)大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎作用研究.pdf

1、目的:
　　類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(Rheumatoidarthritis，RA)是一種慢性、對稱性多關(guān)節(jié)炎為主要表現(xiàn)的自身免疫性疾病，病變呈持續(xù)、反復(fù)發(fā)作的過程，其主要病理變化為關(guān)節(jié)滑膜的慢性炎癥，炎細胞浸潤，滑膜血管新生和血管翳的形成，血管翳可向鄰近軟骨及骨組織侵蝕，導(dǎo)致骨質(zhì)破壞，關(guān)節(jié)畸形和功能喪失。由于其病因及發(fā)病機制尚未完全清楚，至今仍無良好的治療方法。目前臨床上應(yīng)用的非甾體類抗炎藥，糖皮質(zhì)激素等毒副作用大，且缺乏長期臨床用藥的安全

2、性和耐受性，而針對某些細胞因子的生物制劑價格又較為昂貴，導(dǎo)致患者長期服用依從性差，不利于疾病控制，因此選擇一種效價比好、低毒高效的藥物顯的尤為重要。近年來，祖國醫(yī)學(xué)治療RA的臨床研究取得了一定的進展，療效可靠，優(yōu)勢明顯，尤其在減少西藥毒副作用、降低復(fù)發(fā)率、提高療效等方面作用肯定，顯示了良好的前景。
　　RA屬于中醫(yī)“痹證”范疇，風(fēng)寒濕邪侵襲，痰濕瘀阻經(jīng)絡(luò)是其主要病因機制，正氣不足、肝腎虧虛是其發(fā)生發(fā)展的根本原因，制附子溫經(jīng)通絡(luò)，是

3、治療類風(fēng)濕疾病的重要藥物之一，本實驗以弗氏完全佐劑所誘導(dǎo)的佐劑性關(guān)節(jié)炎(adjuvantarthritis，AA)大鼠模型為基礎(chǔ)，通過動態(tài)觀察制附子用藥2周、4周時對AA大鼠足腫脹率、血清NO、IL-1β水平以及滑膜血管新生及軟骨破壞等病理過程中相關(guān)因子的影響，以期探討該藥治療大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎的初步機制。
　　方法:
　　[1]建立佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠模型。
　　[2]通過觀察制附子用藥2周、4周時對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠足腫脹

4、率、血清NO、IL-1β、滑膜病理改變的影響，初步探討制附子對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠免疫炎癥的干預(yù)作用。
　　[3]通過免疫組織化學(xué)染色的方法檢測滑膜組織中VEGF、HIF-1α的表達，同時觀察滑膜病理切片血管新生情況，探討制附子對滑膜血管新生的影響。
　　[4]用免疫組織化學(xué)染色方法檢測關(guān)節(jié)軟骨細胞iNOS、MMP-3的表達，同時通過光鏡下觀察滑膜及軟骨組織的病理改變，探討制附子對大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎軟骨破壞的影響。
　　結(jié)果

5、:
　　1.成功建立大鼠佐劑型關(guān)節(jié)炎模型。模型組大鼠出現(xiàn)關(guān)節(jié)紅腫，尾巴結(jié)節(jié)，耳朵紅色斑點及結(jié)節(jié)，足腫脹率明顯增高(p<0.05)，血清NO、IL-1β水平亦顯著升高(p<0.05)。
　　2.制附子用藥2周后可顯著降低AA大鼠足腫脹率，與模型組比較呈顯著性差異(p<0.05)；可有效降低血清NO、IL-1β水平(p<0.05)，用藥組大鼠滑膜病理分級與關(guān)節(jié)炎指數(shù)評分，與模型組相比有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。
　　3.

6、制附子用藥組與同期模型組相比，4周組可明顯降低大鼠滑膜組織中VEGF的表達(p<0.05)，對滑膜組織中HIF-1α的表達無明顯降低作用(p>0.05)，2周組對VEGF、HIF-1α的表達無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)；滑膜病理及血管生成評分結(jié)果顯示，模型組大鼠滑膜組織大量纖維增生，血管增生及新生血管形成，滑膜增生夾雜新生的血管，用藥4W組明顯抑制了AA大鼠滑膜血管增生，減少血管新生，用藥2W組與同期模型組比較無顯著改善。
　　4

7、.制附子用藥4周組可明顯降低大鼠滑膜組織中iNOS、MMP-3的表達，與模型比較有顯著差異(p<0.05)，用藥2周組對iNOS、MMP-3的表達亦有降低趨勢，差異無顯著性(p>0.05)；光鏡下對滑膜和軟骨進行病理指數(shù)分級顯示，模型組模型組大鼠關(guān)節(jié)軟骨破壞嚴重，軟骨細胞固縮或者消失，出現(xiàn)軟骨下骨侵蝕。用藥4周組大鼠關(guān)節(jié)受到輕中度損傷，未見骨侵蝕，抑制了大鼠關(guān)節(jié)軟骨破壞。用藥2W組與同期模型組比較無顯著改善。
　　結(jié)論:
　

8、　1.制附子用藥2周時可通過抑制促炎因子表達，降低AA大鼠足腫脹率，調(diào)整細胞因子的網(wǎng)絡(luò)失衡，干預(yù)免疫炎癥。
　　2.制附子用藥4周組可明顯抑制部分促血管新生相關(guān)因子的表達，減少滑膜血管新生；同時可降低部分軟骨破壞相關(guān)因子的表達，對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠關(guān)節(jié)軟骨破壞起到一定的抑制作用，從而改善了AA大鼠病情。
　　3.制附子辛散溫通，散寒止痛，用藥2周時可有效抗炎，緩解AA大鼠癥狀，減輕足腫脹率；繼續(xù)用藥4周時，通過其補腎陽、益骨生