NF-κB在迷路炎發(fā)病中的作用以及PDTC的影響研究.pdf

1、背景及目的:既往認(rèn)為內(nèi)耳缺乏免疫細(xì)胞,是一免疫豁免器官,不受全身免疫反應(yīng)的影響,而近來的研究發(fā)現(xiàn), 內(nèi)淋巴囊及其周圍含有漿細(xì)胞和免疫活性細(xì)胞,內(nèi)耳處于免疫系統(tǒng)的監(jiān)視之下,對內(nèi)外源性刺激能發(fā)生快速反應(yīng)而引起迷路炎或免疫應(yīng)答.核轉(zhuǎn)錄因子-kB(nuclear transcription factor kB, NF-kB)是一類重要的轉(zhuǎn)錄激活因子,在調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)中起著關(guān)鍵作用,它的過度活化可引起機體的炎性損害.因此我們推測迷路炎的發(fā)生可能與局

2、部NF-κB的過度活化有關(guān).該研究旨在通過檢測迷路炎時NF-κB的p65亞基及其下游因子TNF-α、IL-2 mRNA的變化,探討NF-kB與迷路炎的關(guān)系,期望為炎性損害引起的內(nèi)耳功能障礙的防治提供一定的理論依據(jù).方法:1、建立迷路炎動物模型:48只健康豚鼠,隨機分為LPS(lipopolysaccharide) 0.01、0.1、1mg/ml實驗組和對照組,LPS各實驗組分別用0.01、0.1、1mg/ml的LPS注入中耳腔,對照組注

3、入等量生理鹽水.在注藥后6h、48h、2w三個時間點,每組各取4只,做聽性腦干反應(yīng)(auditory brainstem response,ABR)檢測和光鏡、電鏡形態(tài)觀察耳蝸病理變化,選擇建立模型的合適濃度.2、NF-kB p65和TNF-α、IL-2 mRNA的檢測:健康豚鼠42只,隨機分為三組:①LPS實驗組,1mg/ml的LPS注入中耳腔;②二硫代氨基甲酸吡咯烷(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)

4、治療組,鼓膜注射1mg/ml LPS前,以100mg/kg體重經(jīng)腹腔注射PDTC;③對照組,雙耳注入生理鹽水.以6h、48h、2w為觀察點,ABR檢測后處死動物,分別用免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry,IHC)和原位雜交(in-situ hybridization histochemistry,ISHH)技術(shù)檢測耳蝸NF-kB p65和TNF-α、IL-2 mRNA的表達.結(jié)論:1、中耳腔內(nèi)不同濃度的LPS對豚鼠內(nèi)