NF-κB對哮喘氣道重塑平滑肌細胞表型轉(zhuǎn)化的作用及PDTC干預(yù)研究.pdf

1、目的：氣道平滑肌表型轉(zhuǎn)換是哮喘氣道重塑的重要特征，而前期體外研究發(fā)現(xiàn)NF-kB信號通路對其表型轉(zhuǎn)化起到關(guān)鍵性作用。在此基礎(chǔ)上，本研究通過在體檢測哮喘氣道平滑肌細胞表型標志物的改變特征及相關(guān)功能改變，探討NF-kB信號通路對其影響，同時明確干預(yù)NF-kB信號通路對哮喘氣道重塑、氣道高反應(yīng)性及慢性炎癥的作用，為尋找新的哮喘治療方法提供理論及實驗依據(jù)。
　　方法:采用腹腔注射和重復(fù)霧化吸入卵清白蛋白的方法建立急性及慢性哮喘小鼠模型，NF

2、-kB特異性抑制劑PDTC腹腔注射對哮喘小鼠進行干預(yù)；采用BUXCO無創(chuàng)肺功能儀測定各組小鼠氣道高反應(yīng)性；HE染色觀察組織大體改變及炎癥浸潤度；Masson trichrome染色檢測膠原沉積情況；免疫組織化學(xué)檢測氣道平滑肌層厚度；通過形態(tài)學(xué)定量分析對比各組膠原面積及氣道平滑肌層厚度；α-SMA和 PCNA免疫熒光檢測增殖細胞數(shù)量；RT-PCR檢測肺支氣管表型標志物以及COL1A1mRNA表達量；Western-Blot檢測磷酸化 P6

3、5和α-SMA蛋白表達量；RayBiotech蛋白芯片檢測血清中炎癥因子表達水平。
　　結(jié)果：（1）急性及慢性哮喘小鼠氣道高反應(yīng)性指標Penh值較對照組均顯著增高，而干預(yù)組較哮喘組顯著降低；（2）慢性哮喘小鼠平滑肌層面積較對照組顯著增高，干預(yù)組則有顯著緩解；急性哮喘小鼠平滑肌層增厚不顯著；（3）氣道膠原面積定量急性哮喘各組定量比較亦無顯著差別，慢性哮喘模型中，形態(tài)定量學(xué)分析發(fā)現(xiàn)哮喘組膠原面積顯著高于其對照組，而 PDTC干預(yù)后較哮

4、喘組膠原面積顯著減少；（4）免疫熒光染色未檢出氣道平滑肌與 PCNA共表達，可見急性哮喘肺內(nèi)PCNA+的細胞數(shù)量較正常組明顯增多，主要位于氣道以及血管周圍，慢性哮喘小鼠未檢出增殖細胞；（5）通過 qPCR發(fā)現(xiàn)慢性哮喘模型中，哮喘組α-SMA、calponin和 SM-MHC較對照組顯著下降。急性哮喘小鼠模型中，只有 calponin在哮喘組中顯著下調(diào)，PDTC干預(yù)組在慢性和急性哮喘模型中均有緩解表型轉(zhuǎn)化的作用，然而calponin在慢性

5、哮喘模型中的下降不能被PDTC干預(yù)逆轉(zhuǎn)。Western blot顯示PDTC干預(yù)后哮喘小鼠phospho-P65表達量顯著降低，同時α-SMA蛋白升高。（6）急性哮喘模型中，哮喘組血清G-CSF、IL-6、和IL-17相比正常對照組顯著增高，PDTC干預(yù)顯著降低了G-CSF和IL-6水平，但不影響IL-17。慢性哮喘模型中，哮喘組中只有IL-17和TNF-α顯著增高，TNF-α在干預(yù)組中顯著降低。
　　結(jié)論：（1）哮喘模型小鼠氣道