b-FGF、NF-κB在哮喘大鼠氣道重塑中的表達(dá)及布地奈德的干預(yù)作用.pdf

1、支氣管哮喘(bronchial asthma)是一種以氣道慢性炎癥、氣道高反應(yīng)性及氣道重塑為基本病理特征的慢性疾病。氣道重塑(airway remodeling)是以氣道平滑肌增生肥大、基底膜增厚和上皮下纖維化為基本的病理改變,是不可逆性氣道阻塞和持續(xù)性氣道高反應(yīng)的重要病理基礎(chǔ)。哮喘氣道重塑的發(fā)生機(jī)制比較復(fù)雜,目前尚未完全清楚。
　　因此研究哮喘氣道重塑的病理特征及發(fā)生機(jī)制,尋找有效的治療方法具有重要的意義。堿性成纖維細(xì)胞生長因子

2、(basic fibroblast growthfactor,b-FGF)是一種具有廣泛生物學(xué)活性的肽類生長因子,具有廣泛的細(xì)胞增殖效應(yīng)及誘導(dǎo)血管生成等作用。核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)是一種廣泛存在體內(nèi)的多種細(xì)胞的核轉(zhuǎn)錄因子,可以通過調(diào)節(jié)多種因子如生長因子、細(xì)胞因子、炎性介質(zhì)、趨化因子等的生成和活化而致氣道重構(gòu)。本實(shí)驗(yàn)旨在通過建立大鼠的哮喘氣道重塑模型,研究b-FGF及NF-κ3在大鼠肺內(nèi)的表達(dá)以及二

3、者在哮喘氣道重塑的發(fā)生機(jī)制中的作用,并通過應(yīng)用布地奈德進(jìn)行干預(yù),為哮喘的早期干預(yù)及治療提供理論依據(jù)。
　　材料與方法：
　　1.對(duì)象和模型制備方法健康雄性清潔級(jí)SD大鼠45只,體重(200±10)g,6~7周齡,隨機(jī)分為三組:正常對(duì)照組(A組)、哮喘模型組(B組)、布地奈德干預(yù)組(C組)。制備方法:第一天B組和C組每只大鼠分別腹腔注射1ml10％卵蛋白混懸液(內(nèi)含1ml生理鹽水,100mg氫氧化鋁,100mg卵蛋白)進(jìn)行致敏

4、,A組用生理鹽水代替卵蛋白,第8天再重復(fù)一次;第15天B組和C組開始用卵蛋白激發(fā),將大鼠置于特制密閉玻璃容器中,用壓縮霧化器噴入1％卵蛋白液,隔日一次,每次20分鐘,共激發(fā)21次,A組用生理鹽水代替,C組于霧化卵蛋白液半小時(shí)后給予霧化吸入布地奈德液進(jìn)行干預(yù)。
　　2.標(biāo)本采集各組大鼠分別于末次激發(fā)后24小時(shí)內(nèi)用苯巴比妥麻醉(100mg/只)下開胸,經(jīng)右心室插管至肺動(dòng)脈,用生理鹽水快速灌洗后,取右肺中葉,置于10％多聚甲醛內(nèi)固定24

5、h,酒精梯度脫水,石蠟包埋,選取垂直、平行氣道取材,做厚度為5μm的切片,分別做蘇木素—伊紅(HE)染色和免疫組織化學(xué)染色。
　　3.平滑肌厚度及氣道上皮厚度測(cè)量采用計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行分析處理,在高倍鏡下.(×400)找相同級(jí)別的兩個(gè)完整的支氣管橫斷面,測(cè)量平滑肌厚度和氣道上皮厚度,分別取其平均值做為最后的測(cè)定結(jié)果,單位μm。
　　4.b-FGF、NF-κB表達(dá)水平的測(cè)定應(yīng)用計(jì)算機(jī)圖像病理分析系統(tǒng),在高倍鏡(×400)下

6、每張切片隨機(jī)選取5個(gè)具有代表性的視野,分別選取陽性區(qū)測(cè)量其灰度值,計(jì)算其平均灰度值做為最后的測(cè)定結(jié)果。
　　5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((?)±s)表示,各組樣本均數(shù)經(jīng)過方差齊性檢驗(yàn)后,采用單因素方差分析,組間進(jìn)一步兩兩比較用LSD法;各因素之間的相關(guān)性采用直線相關(guān)分析。以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn),P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.肺大體標(biāo)本觀察各

7、組大鼠肺臟切面均無肺實(shí)質(zhì)出血和化膿性病灶。哮喘組大鼠肺標(biāo)本與對(duì)照組相比體積增加明顯,充血明顯,可見間質(zhì)內(nèi)有少量的纖維樣囊腫。干預(yù)組大鼠肺標(biāo)本上述改變較哮喘組顯著減輕。
　　2.HE染色哮喘組大鼠肺組織HE染色可見支氣管上皮脫落,粘膜中斷、皺襞增加,氣道壁厚度增加,管腔狹窄,粘膜下及管壁周圍可見大量炎癥細(xì)胞(以淋巴細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞為主)。干預(yù)組大鼠氣道上皮細(xì)胞偶有脫落,粘膜相對(duì)光滑完整。氣道壁增厚及炎癥細(xì)胞浸潤情況均較哮喘組明顯減

8、輕。對(duì)照組大鼠肺組織幾乎無上述病理改變。
　　3.免疫組化染色
　　3.1氣道平滑肌厚度及氣道上皮厚度的比較:哮喘組大鼠氣道上皮厚度和平滑肌層厚度與對(duì)照組相比明顯增加,經(jīng)布地奈德干預(yù)后氣道上皮厚度和平滑肌層厚度與哮喘組大鼠比較明顯降低,P<0.05。
　　3.2 b-FGF在大鼠氣道壁的表達(dá):b-FGF在大鼠肺內(nèi)主要表達(dá)于氣道上皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和血管壁平滑肌細(xì)胞;b-FGF在哮喘組的表達(dá)(126.21±6

9、.46)顯著高于對(duì)照組(106.05±7.67),P<0.05;經(jīng)布地奈德干預(yù)后的大鼠肺內(nèi)的表達(dá)(111.61±5.52)明顯低于哮喘組大鼠,P<0.05。
　　3.3 NF-κB在大鼠氣道壁的表達(dá):NF-κB在大鼠肺內(nèi)主要表達(dá)于氣道上皮細(xì)胞、氣道平滑肌細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞。NF-κB在哮喘組的表達(dá)(134.15±9.42)顯著高于對(duì)照組(102.51±6.77),P<0.05;干預(yù)組大鼠肺內(nèi)的表達(dá)(110.65±8.71)明顯低于

10、哮喘組大鼠,P<0.05。
　　3.4相關(guān)性分析:哮喘組大鼠肺內(nèi)b-FGF與NF-κB的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.531,P<0.05)。哮喘大鼠肺內(nèi)b-FGF與NF-κB表達(dá)與氣管上皮的厚度及平滑肌厚度呈正相關(guān)性(rb-FGF=0.574,rNF-κB=0.711,P<0.05),與氣道上皮厚度呈正相關(guān)性(rb-FGF=0.601,rNF-κB=0.730,P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.堿性成纖維細(xì)胞生長因子和核