NF-κB抑制劑PDTC對鈾礦塵致巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)的調(diào)控作用.pdf

1、目的：探討鈾礦塵致 RAW264.7炎癥反應(yīng)過程中 NF-κB對TNF-α、IL-6、MCP-1、iNOS和 NO的調(diào)節(jié)作用，分析核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB在鈾礦塵致肺部損傷機制中的作用，以及尋找抑制鈾礦塵致肺纖維化的重要靶點。
　　方法：采用MTT法檢測不同濃度鈾礦塵作用于RAW264.7細(xì)胞不同時間對細(xì)胞存活率的影響；Western Blot檢測鈾礦塵對細(xì)胞核內(nèi)NF-κB p65蛋白及細(xì)胞漿內(nèi)iNOS蛋白表達的影響；Q-PCR檢測鈾

2、礦塵對RAW264.7細(xì)胞中TNF-α、IL-6、MCP-1、iNOS mRNA的影響；ELISA檢測鈾礦塵對 RAW264.7細(xì)胞培養(yǎng)上清液中 TNF-α、IL-6、MCP-1含量的影響；硝酸還原酶法檢測鈾礦塵對 RAW264.7細(xì)胞培養(yǎng)上清液中NO含量的影響。
　　結(jié)果：MTT結(jié)果顯示0、15、30、60、120、240μg/cm2濃度鈾礦塵分別作用于RAW264.7細(xì)胞12、24、48h后，RAW264.7細(xì)胞存活率呈作用劑

3、量和作用時間依賴性下降。60μg/cm2鈾礦塵作用于RAW264.7細(xì)胞后，細(xì)胞核內(nèi)NF-κB p65蛋白表達水平隨著鈾礦塵作用時間的延長呈上升趨勢，至12h時鈾礦塵組NF-κB p65蛋白相對表達量是對照組的5.10倍；細(xì)胞內(nèi)TNF-α、IL-6、MCP-1、iNOS mRNA的表達水平較對照組升高；細(xì)胞培養(yǎng)上清液中TNF-α、IL-6、MCP-1以及NO含量隨著鈾礦塵作用時間的延長呈上升趨勢，至24h時鈾礦塵組TNF-α、IL-6、

4、MCP-1及NO表達量分別為（12827.78±518.77） pg/ml、（224.63±10.38）pg/ml、（4178.59±26.04）pg/ml、（202.30±10.62）μmol/L，均顯著高于該時間點對照組的表達量；細(xì)胞漿內(nèi)iNOS蛋白表達水平隨著鈾礦塵作用時間的延長呈上升趨勢，至24h時鈾礦塵組iNOS蛋白相對表達量是對照組的4.50倍。用25μmol/L PDTC干預(yù)后，細(xì)胞核內(nèi)NF-κB p65蛋白表達

5、水平與對照組接近，顯著低于鈾礦塵組的表達水平；細(xì)胞上清液中 TNF-α、IL-6、NO含量明顯低于鈾礦塵組，與對照組表達量較接近；細(xì)胞上清液中 MCP-1含量與鈾礦塵比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，明顯高于對照組的表達水平；細(xì)胞漿中iNOS蛋白表達水平與對照組接近，顯著低于鈾礦塵組的表達水平。
　　結(jié)論:
　　1.15-240μg/cm2鈾礦塵可以抑制小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)其NF-κB、TNF-α、IL-6、MCP