NF-κB抑制劑PDTC逆轉(zhuǎn)K562-AO-,2-細胞耐藥性及其機制的研究.pdf

1、目的：研究NF-κB的異常活化在K562/AO<,2>細胞耐藥機制中的作用，為逆轉(zhuǎn)白血病耐藥性提供新靶點。 方法：采用MTT比色法分別檢測K562/AO<,2>細胞的耐藥性，吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽(PDTC)對K562/AO<,2>細胞增殖的影響以及非細胞毒劑量PDTC、維拉帕米(Ver)預(yù)作用后對K562/AO<,2>細胞藥物敏感性的影響；采用免疫細胞化學(xué)法檢測K562、K562/AO<,2>細胞NF-κB表達以及不同濃度PD

2、TC作用一定時間對其表達的抑制作用；分別采用RT-PCR、流式細胞術(shù)檢測K562、K562/AO<,2>細胞mdr-1mRNA、P-gP相對表達水平以及不同濃度PDTC作用一定時間對其表達的影響。 結(jié)果：①阿霉素(ADM)對K562/AO<,2>細胞、K562細胞的半數(shù)抑制濃度(IC<,50>)分別為(33.72±1.72)和(0.57±0.07)，兩者相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，K562/AO<,2>細胞對ADM的耐

3、藥性是K562細胞的59倍；(0.6-160)umol/L PDTC呈濃度依賴性抑制K562/AO<,2>細胞增殖；非細胞毒劑量PDTC預(yù)作用后，ADM對K562/AO<,2>細胞的IC<,50>顯著降低，相對逆轉(zhuǎn)耐藥效率為93.03％，強于經(jīng)典耐藥逆轉(zhuǎn)劑Ver的作用81.07％，兩者相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)：②K562/AO<,2>細胞NF-κB表達水平高于K562細胞，分別為(123.4±13.9)和(28.4±2.6)

4、，兩者相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)：三組非細胞毒劑量PDTC作用后，K562/AO<,2>細胞NF-κB表達均受抑制，在一定范圍內(nèi)呈時間和濃度依賴性；0.2 umol/L PDTC作用24h抑制效應(yīng)最強，K562/AO<,2>細胞NF-κB表達降至(25.2±5.1)，接近K562細胞水平(P>0.05)；K562/AO<,2>和K562細胞無干預(yù)組在觀察的48h內(nèi)NF-κB表達無明顯變化(P>0.05)；③K562/AO<,2

5、>和K562細胞mdr-1 mRNA相對表達水平分別為(0.696±0.084)和(0.019±0.006)，兩者相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；三組非細胞毒劑量PDTC作用K562/AO<,2>細胞后，其mdr-1 mRNA相對表達水平降低，在一定范圍內(nèi)呈時間和濃度依賴性；0.2 umol/L PDTC作用48h抑制效應(yīng)最強，mdr-1 mRNA相對表達水平降至(0.268±0.050)，但與K562細胞相比，差異仍有統(tǒng)計學(xué)意義

6、(P<0.05)；0.2 umol/LPDTC對mdr-1 mRNA表達的抑制效應(yīng)強于Ver；K562/AO<,2>和K562細胞無干預(yù)組在觀察的48h內(nèi)mdr-1 mRNA相對表達水平無明顯變化(P>0.05)；④K562/AO<,2>細胞P-gp表達高于K562細胞，分別為(617.9±26.3)和(283.0±5.8)，兩者相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；三組非細胞毒劑量PDTC作用K562/AO<,2>細胞48h后，其P-

7、gp水平降低，分別為(385.0±28.6)、(465.0±14.1)、(496.5±14.8)，抑制作用呈濃度依賴性；0.2 umol/L PDTC作用48h抑制效應(yīng)最強，但此時K562/AO<,2>細胞P-gp表達仍高于K562細胞，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；0.2 umol/L PDTC對P-gp表達的抑制效應(yīng)強于Ver；K562/AO<,2>和K562細胞無干預(yù)組在觀察的48h內(nèi)P-gp表達無明顯變化(P>0.05)。