聯(lián)合抑制sorcin和mdr1基因逆轉(zhuǎn)K562-A02細胞株多藥耐藥性.pdf

1、目的：探討聯(lián)合抑制可溶性耐藥相關(guān)鈣結(jié)合蛋白基因（sorcin）和多藥耐藥相關(guān)蛋白基因（mdr1）對K562/AO2細胞株多藥耐藥性的影響。
　　方法：使用針對sorcin和mdr1基因特異的反義寡核苷酸（ASODN），運用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)將其導(dǎo)入K562/A02細胞后，通過實時定量RT-PCR、Western Blot及流式細胞儀分析方法檢測細胞內(nèi)sorcin和mdr1基因在mRNA和蛋白表達水平的變化，運用MTT方法檢測轉(zhuǎn)染后細胞

2、對阿霉素及其他化療藥物敏感性的變化，運用流式細胞儀檢測轉(zhuǎn)染后細胞對羅丹明123外排功能的變化及Annexin-V/PI雙染法檢測轉(zhuǎn)染后細胞對VP16誘導(dǎo)凋亡耐受的變化。
　　結(jié)果：將針對sorcin和mdr1基因特異的反義寡核苷酸（ASODN），通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染至K562/A02細胞后，sorcin和mdr1在 mRNA和蛋白水平表達較未轉(zhuǎn)染細胞相比明顯下調(diào)；單獨轉(zhuǎn)染sorcin-ASODN或mdr1-ASODN細胞對ADR、VCR

3、、VP-16及 HHT的敏感性較未轉(zhuǎn)染細胞相比顯著提高，共轉(zhuǎn)染sorcin-ASODN和mdr1-ASODN細胞對化療藥物的敏感性較單獨轉(zhuǎn)染細胞相比顯著提高；單獨轉(zhuǎn)染mdr1-ASODN細胞藥物外排功能較未轉(zhuǎn)染細胞相比顯著下降，單獨轉(zhuǎn)染sorcin-ASODN細胞藥物外排功能較未轉(zhuǎn)染細胞相比無差異，雙轉(zhuǎn)染 sorcin-ASODN和 mdr1-ASODN細胞藥物外排功能較單獨轉(zhuǎn)染mdr1-ASODN細胞相比無顯著性差異；單獨轉(zhuǎn)染mdr1

4、-ASODN或sorcin-ASODN細胞對 VP-16誘導(dǎo)凋亡耐受性較未轉(zhuǎn)染細胞相比顯著下降，雙轉(zhuǎn)染sorcin-ASODN和 mdr1-ASODN細胞對 VP-16誘導(dǎo)凋亡耐受性較單獨轉(zhuǎn)染mdr1-ASODN或sorcin-ASODN細胞相比有顯著性差異。
　　結(jié)論：
　?、俦狙芯恐惺褂冕槍orcin和mdr1特異的ASODN,通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法，能夠成功下調(diào)K562/A02細胞株中sorcin和mdr1基因在mRNA

5、和蛋白水平上的表達。
　　②單獨抑制sorcin或mdr1可以有效恢復(fù)K562/A02細胞對化療藥物的敏感性，但同時抑制兩者的表達，能更顯著恢復(fù)對化療藥物的敏感性。
　?、蹎为氁种苨orcin并不能影響K562/A02細胞內(nèi)化療藥物的蓄積，但可引起細胞對化療藥物誘導(dǎo)凋亡耐受性的下降；同時抑制sorcin和mdr1的表達較單獨抑制mdr1的表達，胞內(nèi)藥物的含量也沒有顯著性差異，但化療藥物誘導(dǎo)凋亡耐受性顯著低于單獨抑制sorci