引種紫錐菊中咖啡酸衍生物標(biāo)準(zhǔn)化研究.pdf

1、紫錐菊(Echinacea purpurea)菊科紫錐菊屬植物，是迄今為止世界上發(fā)現(xiàn)的極少數(shù)具有免疫力增強(qiáng)和抗炎雙重作用的植物藥之一，具有廣泛的治療范圍和穩(wěn)定的療效。近年來(lái)紫錐菊的免疫活性也逐漸被國(guó)內(nèi)重視，且已經(jīng)在我國(guó)大面積的引種栽培。以國(guó)產(chǎn)紫錐菊為原料的各種制劑已經(jīng)上市，所以有必要對(duì)引種紫錐菊和其制劑的質(zhì)量進(jìn)行控制?，F(xiàn)代藥理研究表明，咖啡酸衍生物是紫錐菊中一類重要的活性成分，具有增強(qiáng)免疫、抗炎和抗氧化等藥理作用，在該類植物藥和保健食品

2、中，咖啡酸衍生物是其質(zhì)量控制的重要指標(biāo)成分。因而對(duì)國(guó)產(chǎn)紫錐菊中咖啡酸衍生物的分離鑒定以及標(biāo)準(zhǔn)品的制備就非常的必要。因此本研究結(jié)合植物化學(xué)理論和現(xiàn)代化學(xué)分離技術(shù)，對(duì)安徽桐城紫錐菊地上部分進(jìn)行系統(tǒng)的化學(xué)成分預(yù)試的基礎(chǔ)上，對(duì)其中咖啡酸衍生物進(jìn)行了定向追蹤和分離，最終應(yīng)用HPLC方法制備了咖啡酸衍生物標(biāo)準(zhǔn)品。研究的具體內(nèi)容包括以下三個(gè)部分。
　　 (1)咖啡酸衍生物的追蹤條件確定：該類化合物分子呈酸性，在溶液中易電離，分子極性大，在λ3

3、65nm下有熒光，確定TLC條件為以乙酸丁酯：甲酸：水=6:0.5:0.8；確定HPLC檢測(cè)條件為Agilent Eclipse XDB-C18色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)；柱溫35℃；流速1.2ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)330nm；進(jìn)樣量10μl；流動(dòng)相為乙腈(A)-0.3％磷酸溶液(B)梯度洗脫。利用TLC和HPLC跟蹤發(fā)現(xiàn)咖啡酸衍生物主要集中在正丁醇相。
　　 (2)化學(xué)成分的分離和鑒定：采用液液萃取技術(shù)、薄層色譜

4、和凝膠柱色譜半制備高效液相色譜等分離方法，從紫錐菊甲醇提取物的正丁醇相分離得到7個(gè)化合物，經(jīng)MS、1H-NMR、13C-NMR等波譜學(xué)方法并結(jié)合理化性質(zhì)確定為綠原酸(1)，阿魏酸(2)，咖啡酸(3)，菊苣酸(4)，Caffeoyl-feruloyl-(2R，3R)-(+)-tartaric，(5)，尿嘧啶(6)，胸腺嘧啶核苷(7)。以上化合物均為已知化合物。
　　 (3)標(biāo)準(zhǔn)品的制備：由于咖啡酸類衍生物極性較大，首先采用D101

5、大孔吸附樹(shù)脂快速的將咖啡酸衍生物洗脫下來(lái)，將極性較小的成份分開(kāi)，達(dá)到了理想的預(yù)純化的目的。然后調(diào)節(jié)PH3左右，使咖啡酸衍生物主要以分子形態(tài)存在于溶液中，減小極性，減少分離純化的難度，用乙酸乙酯萃取，可以有效的將糖類等極性較大的物質(zhì)去除。其次用RP-18硅膠柱對(duì)得到的樣品進(jìn)一步分離純化，最后用HPLC制備，得到高純度的菊苣酸、綠原酸、阿魏酸、咖啡酸和Caffeoyl-feruloyl一(2R，3R)-(+)-tartaric等對(duì)照品。該提