HMGB1-siRNA預(yù)處理減輕小鼠急性肝損傷的研究.pdf

1、目的：驗(yàn)證HMGB1-siRNA的有效性，并研究HMGB1-siRNA預(yù)處理對(duì)小鼠急性肝損傷的保護(hù)效果，探討其可能的作用機(jī)制。
　　方法：設(shè)計(jì)HMGB1-siRNA序列，應(yīng)用該HMGB1-siRNA轉(zhuǎn)染TEpiC和NIH3T3兩種細(xì)胞，驗(yàn)證該HMGB1-siRNA的有效性。HMGB1-siRNA轉(zhuǎn)染BALB/c小鼠，RT-PCR檢測(cè)小鼠各臟器HMGB1 mRNA的表達(dá)水平。建立BALB/c小鼠急性肝損傷模型。實(shí)驗(yàn)分組為空白對(duì)照組、

2、實(shí)驗(yàn)對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，每組6只小鼠。尾靜脈注射conA后24小時(shí)，取各組血清及肝組織。血清檢測(cè)ALT及AST水平。肝組織4％甲醛溶液固定后，HE染色判斷急性肝損傷的程度，免疫組化定性比較各組HMGB1的表達(dá)和釋放情況。
　　結(jié)果：體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)，細(xì)胞轉(zhuǎn)染HMGB1-siRNA后，HMGB1的表達(dá)得到了明顯的抑制。小鼠體內(nèi)轉(zhuǎn)染HMGB1-siRNA后，HMGB1 mRNA的表達(dá)也受到明顯抑制，并以轉(zhuǎn)染后48h左右的抑制效果最為明顯。檢測(cè)

3、各組血清ALT及AST：實(shí)驗(yàn)對(duì)照組ALT水平為1966.3±459.8U/L，實(shí)驗(yàn)組ALT水平為717.7±847.1U/L；兩組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。實(shí)驗(yàn)對(duì)照組AST水平為2008.2±440.7U/L，實(shí)驗(yàn)組AST水平為740.5±732.5U/L；兩組間差異同樣具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。HE及免疫組化染色提示實(shí)驗(yàn)組肝組織肝細(xì)胞損傷程度明顯減輕，肝細(xì)胞內(nèi)HMGB1釋放及細(xì)胞核內(nèi)HMGB1的表達(dá)量明顯減少。