大黃拮抗CpG DNA有效組分的分離制備及其活性研究.pdf

1、目的：膿毒癥是臨床危重病人死亡的主要原因，死亡率高達(dá)50％-60％。CpGDNA是引起膿毒癥的主要病原分子，CpGDNA通過(guò)與TLR9結(jié)合，介導(dǎo)單核/巨噬細(xì)胞的活化并釋放TNF-α、IL-6等細(xì)胞因子，導(dǎo)致膿毒癥、多器官功能衰竭甚至死亡。因此，阻斷CpGDNA與其受體的結(jié)合被認(rèn)為是防治膿毒癥的關(guān)鍵。 臨床研究表明：傳統(tǒng)中藥中含有抗炎活性成分，但由于中藥的化學(xué)成分復(fù)雜，抗炎作用的物質(zhì)基礎(chǔ)不明確，限制了中藥在膿毒癥中的應(yīng)用與發(fā)展。本

2、課題以CpGDNA為靶點(diǎn)，應(yīng)用生物傳感器技術(shù)平臺(tái)，從78種抗炎中藥中定向分離具有拮抗膿毒癥作用的活性物質(zhì)并對(duì)其進(jìn)行生物學(xué)活性的評(píng)價(jià)。 方法：(1)應(yīng)用生物傳感器技術(shù)、建立以CpGDNA為靶點(diǎn)的篩選抗炎中藥的技術(shù)平臺(tái)并對(duì)78種中藥進(jìn)行篩選；(2)利用生物傳感器技術(shù)、硅膠柱層析、離子交換-HPLC技術(shù)，從大黃中定向分離與CpGDNA具有較高結(jié)合活性的組分，并對(duì)得到的組分進(jìn)行初步的活性評(píng)價(jià)，確定活性組分；(3)在體外實(shí)驗(yàn)中，測(cè)定活性組

3、分與CpGDNA、LipidA的結(jié)合能力，觀察活性組分對(duì)LPS、CpGDNA刺激小鼠RAW264.7細(xì)胞分泌炎癥介質(zhì)的抑制作用；(4)在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，觀察活性組分對(duì)致死劑量熱滅活大腸桿菌攻擊小鼠的保護(hù)作用。 結(jié)果：(1)建立了以CpGDNA為靶點(diǎn)應(yīng)用生物傳感器篩選抗炎中藥的技術(shù)平臺(tái)；78種中藥中，地榆、大黃、藏青果等14種中藥與CpGDNA具有較高結(jié)合能力，鴉膽子、赤芍、地榆等9種中藥中與CpGDNA特異性結(jié)合的活性成分含量較高；

4、(2)利用生物傳感器技術(shù)、硅膠柱層析、離子交換-HPLC等技術(shù)定向分離得到與CpGDNA有較高結(jié)合活性的組分——大黃D組分；(3)大黃D組分與CpGDNA、LipidA均具有較高的結(jié)合活性，對(duì)CpGDNA及LPS刺激小鼠RAW264.7細(xì)胞分泌TNF-α有顯著的抑制活性，并呈現(xiàn)良好的量-效關(guān)系；(4)大黃D組分對(duì)致死劑量的熱滅活大腸桿菌攻擊小鼠有顯著的保護(hù)作用，并呈現(xiàn)良好的量-效關(guān)系。 結(jié)論：(1)應(yīng)用生物傳感器、以病原分子Cp