梔子拮抗內(nèi)毒素活性物質(zhì)京尼平苷的分離制備及其活性評(píng)價(jià).pdf

1、構(gòu)成革蘭陰性菌(Gram-negative，G-)外膜的主要成分內(nèi)毒素(lipopolysaccharide，LPS)，是介導(dǎo)細(xì)菌膿毒癥的重要病原分子，LPS由O-側(cè)鏈多糖、核心多糖和脂質(zhì)A(LipidA)三部分組成，其中LipidA是LPS的生物學(xué)活性中心。研究證實(shí)，LPS在膿毒癥發(fā)生過(guò)程中具有重要作用，因此，尋求能拮抗LPS的藥物是預(yù)防和治療G-細(xì)菌介導(dǎo)的膿毒癥的重要手段；傳統(tǒng)中草藥在膿毒癥領(lǐng)域的應(yīng)用具有悠久的歷史。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)實(shí)踐已證

2、明，許多中藥在體內(nèi)外都具有拮抗內(nèi)毒素的作用。然而由于中藥成份復(fù)雜，在分離純化的過(guò)程中缺少有效的活性跟蹤手段，使對(duì)具有拮抗內(nèi)毒素活性中藥的深入研究受到限制。本課題利用本實(shí)驗(yàn)室建立的生物傳感器篩選和跟蹤平臺(tái)，對(duì)與LipidA具有較高結(jié)合活性的梔子進(jìn)行拮抗內(nèi)毒素活性組分的定向分離，以期獲得具有拮抗內(nèi)毒素活性的單體化合物，為膿毒癥的防治研究提供一種可能的手段。 方法：(1)依托課題組前期已經(jīng)建立的生物傳感器篩選平臺(tái)，選擇60種藥物與Li

3、pidA進(jìn)行結(jié)合活性的檢測(cè)，選擇具有高結(jié)合活性的藥物進(jìn)行研究(2)應(yīng)用與LipidA的結(jié)合活性測(cè)定及對(duì)膿毒癥模型動(dòng)物的保護(hù)作用作為分離過(guò)程中的活性跟蹤手段，采用大孔吸附樹(shù)脂、萃取、聚酰胺層析、HPLC等技術(shù)對(duì)梔子進(jìn)行活性組分的定向分離，以期最終得到具有拮抗LPS活性的單體化合物(3)對(duì)所得化合物進(jìn)行HPLC、薄層色譜及熔點(diǎn)測(cè)定等技術(shù)分析。(4)活性評(píng)價(jià)：在體外應(yīng)用鱟試驗(yàn)觀察化合物對(duì)LPS的中和作用，并通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)觀察化合物對(duì)LPS介導(dǎo)的

4、RAW264.7活化的抑制作用；在體內(nèi)觀察其在小鼠體內(nèi)對(duì)LPS的中和作用。 結(jié)果：(1)對(duì)60種清熱解毒中草藥進(jìn)行結(jié)合活性測(cè)定，篩選出22種與LipidA具有較高結(jié)合活性的中藥，并以其中的梔子作為研究對(duì)象(2)從梔子水提取物中定向分離出一個(gè)與LipidA具有較高結(jié)合活性的化合物cJ-1(3)經(jīng)HPLC、薄層色譜及熔點(diǎn)測(cè)定等技術(shù)分析，初步確定CJ-1為京尼平苷(C17H24O10)(4)活性評(píng)價(jià)：京尼平苷在體外對(duì)LPS具有較好的中