蘋果果膠寡糖的分離制備及其活性研究.pdf

1、本文以蘋果皮為原料提取蘋果果膠多糖，對酶解后產(chǎn)生的果膠寡糖進(jìn)行了分離純化及制備，對得到的寡聚半乳糖醛酸進(jìn)行ESI-MS分析，并對其活性進(jìn)行了研究，主要結(jié)果如下：
　　 ⑴蘋果果膠多糖的提取和理化性質(zhì)的測定。蘋果皮經(jīng)水提取、醇沉、Savage脫蛋白及透析，冷凍干燥得蘋果果膠多糖，得率為15.8％；氣相色譜測定結(jié)果表明蘋果果膠主要由GalA、Ga1、Rha、Ara、Glc、Xy1六種單糖組成，其相應(yīng)摩爾比為78.54:6.29:4.

2、71:6.21:2.27:1.98；苯酚-硫酸法測得其總糖含量為91.75％；考馬斯亮藍(lán)法測得其蛋白含量2.33％；間羥聯(lián)苯法測得其糖醛酸含量為76.4％；高效液相色譜法測得果膠甲酯化度為80.7％，乙?；葹?0.6％。
　　 ⑵蘋果果膠寡糖混合物的制備和分離純化。蘋果果膠多糖經(jīng)脫脂化得到果膠酸，以果膠酸為底物通過酶解得到聚合度為2～8的果膠寡糖混合物，運(yùn)用陰離子交換柱層析對果膠寡糖混合物進(jìn)行了分離制備。結(jié)果表明，以果膠酸為底

3、物在40℃用果膠酶(EC.3.2.1.15)酶解反應(yīng)60 min為最佳酶解條件得到果膠寡糖混合物，經(jīng)分離制備得到聚合度為2～5的寡聚半乳糖醛酸單體，總得率為37％，TLC和ESI-MS檢測其純度為92％以上。
　　 ⑶寡聚半乳糖醛酸的ESI-MS分析。在對分離后的寡聚半乳糖醛酸進(jìn)行ESI分析的過程中，我們發(fā)現(xiàn)寡聚半乳糖醛酸在離子化過程中易形成一種二聚體，通過與寡聚半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)的ESI-MS分析的結(jié)果作對比，表明酸性寡糖在離子化

4、過程中都能形成二聚體；二聚體形成后很難解聚，這表現(xiàn)在對二聚體進(jìn)行MS2時(shí)，所需要的碰撞能量大于糖苷鍵斷裂所需要的能量。將寡聚半乳糖醛酸還原后的結(jié)果表明，二聚體是以非共價(jià)鍵(氫鍵)結(jié)合而成。
　　 ⑷寡聚半乳糖醛酸的活性分析。本實(shí)驗(yàn)用MTT法研究寡聚半乳糖醛酸及其與化療藥物5-FU聯(lián)合用藥后對人結(jié)腸癌細(xì)胞(SW-620)的影響，結(jié)果顯示，寡聚半乳糖醛酸與腫瘤化療藥物具有協(xié)同效應(yīng)的傾向。利用FCM分析測定細(xì)胞周期，結(jié)果表明，用寡聚半