凝膠色譜分離純化大黃等中藥有效成分的研究.pdf

1、凝膠色譜技術(shù)是六十年代初發(fā)展起來的一種快速而又簡(jiǎn)單的分離分析技術(shù),設(shè)備簡(jiǎn)單、操作方便,不需要污染性有機(jī)溶劑,對(duì)高分子物質(zhì)有很好的分離效果。目前已經(jīng)廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)、分子生物學(xué)、生物工程學(xué)、分子免疫學(xué)以及醫(yī)學(xué)等有關(guān)領(lǐng)域,該技術(shù)不但應(yīng)用于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究,而且已經(jīng)大規(guī)模地用于工業(yè)生產(chǎn)。瓊脂糖凝膠是由球狀瓊脂糖經(jīng)兩次交聯(lián)而制得的凝膠,其高交聯(lián)結(jié)構(gòu)顯著提高了顆粒剛性和物理化學(xué)穩(wěn)定性,粒度小而粒徑分布范圍窄,屬于高效凝膠,可在高流速下使用,并具有分

2、離范圍寬和分辨率高等特點(diǎn)。已用于天然中草藥中有效成分的分離,成功的分離了黃酮類和多酚類化合物,引起了國(guó)內(nèi)外分離工作者的廣泛關(guān)注。
　　中藥有效成分的提取分離與純化技術(shù)研究是中藥現(xiàn)代化的核心,也是中藥企業(yè)發(fā)展的必經(jīng)之路。開展中藥化學(xué)成分提取分離新技術(shù)的研究,對(duì)于提高企業(yè)的科技實(shí)力與競(jìng)爭(zhēng)力,促進(jìn)中藥現(xiàn)代化的發(fā)展具有重要意義。目前,應(yīng)用瓊脂糖凝膠作為固定相在分離純化天然藥物中的蒽醌、黃酮和多酚等有效成分方面已獲得令人滿意結(jié)果。
　

3、　本文對(duì)瓊脂糖凝膠分離純化大黃、大豆、虎杖、知母、甘草和連翹葉中的有效成分進(jìn)行了研究,建立了分離純化這幾種中草藥中有效成分的新方法,取得了相關(guān)核心技術(shù),并利用紫外光譜(UV)、高效液相色譜(HPLC)、核磁共振波譜(NMR)等對(duì)目標(biāo)產(chǎn)物的純度和化學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行了分析和鑒定,結(jié)合各組分的化學(xué)結(jié)構(gòu)式及凝膠色譜保留時(shí)間,對(duì)瓊脂糖凝膠作為固定相分離純化蒽醌類化合物、黃酮類化合物、異黃酮類化合物和木脂素類化合物的機(jī)理進(jìn)行了探討。
　　1.大黃中

4、有效成分的分離純化
　　以瓊脂糖凝膠為固定相,建立了分離純化大黃蒽醌類化合物和苯乙烯酸的新方法,以55％的甲醇(0.01%的HAC)水溶液作為流動(dòng)相進(jìn)行洗脫,可以得到苯乙烯酸、大黃酸、蘆薈大黃素、大黃酚、大黃素甲醚、大黃素等六部分,分別收集,得到化合物的純度均在95%以上。經(jīng)一步分離從大黃粗提物中分離得到苯乙烯酸、大黃酸、蘆薈大黃素、大黃酚、大黃素甲醚和大黃素六種高純度化合物。
　　根據(jù)大黃藥材粗提物中各組分的化學(xué)結(jié)構(gòu)式以及

5、在瓊脂糖凝膠上的保留時(shí)間,對(duì)瓊脂糖凝膠(Superose12)色譜分離純化大黃有效成分的機(jī)理進(jìn)行了探討。研究結(jié)果表明瓊脂糖凝膠分離純化中草藥中蒽醌類化合物的機(jī)理是目標(biāo)化合物結(jié)構(gòu)式中的羥基與Superose12合成殘留基團(tuán)的氫鍵作用和疏水作用二者的協(xié)同作用,建立了分離純化中草藥中蒽醌類化合物的新方法。
　　2.大豆中異黃酮類化合物的分離純化
　　應(yīng)用瓊脂糖凝膠作為固定相分離純化大豆中的異黃酮類化合物,以40%的甲醇和60%的甲

6、醇溶液作為流動(dòng)相梯度洗脫,經(jīng)一步分離從大豆提取物中得到大豆苷、染料木苷、黃豆黃苷、大豆苷元、染料木素和黃豆黃素六種高純度化合物,純度分別為99.0%,99.0%,90.5%,99.0%,94.5%和99.0%。
　　根據(jù)大豆粗提物中各組分的化學(xué)結(jié)構(gòu)式以及在瓊脂糖凝膠上的保留時(shí)間,對(duì)瓊脂糖凝膠色譜分離純化異黃酮類化合物的機(jī)理進(jìn)行了探討。研究結(jié)果表明瓊脂糖凝膠分離純化中草藥中異黃酮類成分的機(jī)理是目標(biāo)化合物結(jié)構(gòu)式中的羥基與Superos

7、e12合成殘留基團(tuán)的氫鍵作用和疏水作用二者的協(xié)同作用,建立了分離純化中草藥中異黃酮類化合物的新方法。
　　3.虎杖中有效成分的分離純化
　　以瓊脂糖凝膠為填料,建立了分離純化虎杖中有效成分的新方法。以65%的甲醇溶液作為流動(dòng)相,一步分離可以得到白藜蘆醇苷、大黃素-8-O-?-D-葡萄吡喃糖甙、白藜蘆醇和大黃素四種高純度化合物。
　　根據(jù)虎杖藥材粗提物中各組分的化學(xué)結(jié)構(gòu)式以及在瓊脂糖凝膠上的保留時(shí)間,對(duì)瓊脂糖凝膠(Sup

8、erose12)色譜分離純化虎杖有效成分的機(jī)理進(jìn)行了探討。研究結(jié)果表明瓊脂糖凝膠分離純化虎杖有效成分的機(jī)理是目標(biāo)化合物結(jié)構(gòu)式中的羥基與Superose12合成殘留基團(tuán)的氫鍵作用和疏水作用二者的協(xié)同作用,建立了分離純化虎杖有效成分的新方法。
　　4.知母中有效成分的分離純化
　　建立了瓊脂糖凝膠作為固定相分離純化知母中有效成分的新方法,以60%的甲醇溶液作為洗脫流動(dòng)相,從知母粗提物中一步分離得到單甲基-順-扁柏樹脂酚、順-扁柏

9、樹脂酚兩種高純度木脂素類化合物和新芒果苷、芒果苷兩種黃酮類化合物,純度分別為96.1%,98.0%,97.2%和98.1%。
　　根據(jù)中藥知母粗提物中各組分的化學(xué)結(jié)構(gòu)式以及在瓊脂糖凝膠上的保留時(shí)間,對(duì)瓊脂糖凝膠色譜分離純化木脂素、黃酮類化合物的機(jī)理進(jìn)行了研究。最終得出瓊脂糖凝膠分離純化知母中有效成分的機(jī)理是目標(biāo)化合物結(jié)構(gòu)式中的羥基與Superose12合成殘留基團(tuán)間的氫鍵作用和疏水作用二者的協(xié)同作用,建立了分離純化知母中有效成分的

10、新方法。
　　5.甘草中有效成分的分離純化
　　以瓊脂糖凝膠作為固定相,建立了分離純化甘草中有效成分的新方法,即以60%的甲醇溶液作為流動(dòng)相進(jìn)行洗脫,經(jīng)一步分離從甘草中分離得到異甘草素葡萄糖芹菜苷、甘草糖苷A、異甘草素和甘草香豆素四種高純度化合物,純度分別為91.3%,95.1%,91.8%和96.7%。
　　根據(jù)甘草粗提物中各組分的化學(xué)結(jié)構(gòu)式以及在瓊脂糖凝膠上的保留時(shí)間,對(duì)瓊脂糖凝膠色譜分離純化甘草中有效成分的機(jī)理進(jìn)

11、行了探討。研究結(jié)果表明瓊脂糖凝膠分離純化甘草中有效成分的機(jī)理是目標(biāo)化合物結(jié)構(gòu)式中的羥基與Superose12合成殘留基團(tuán)的氫鍵作用和疏水作用二者的協(xié)同作用,開創(chuàng)了分離純化甘草中有效成分的新方法。
　　6.連翹葉中有效成分的分離純化
　　建立了瓊脂糖凝膠作為固定相分離純化連翹葉中有效成分的新方法,即以30%的甲醇溶液作為流動(dòng)相進(jìn)行洗脫,從連翹葉中一步分離得到連翹苷、連翹酯苷和蘆丁三種高純度化合物,純度分別為99.2%,96.3