免疫介導再生障礙性貧血小鼠干擾素-γ與蛋白激酶C-θ表達及其意義.pdf

1、目的：在再生障礙性貧血(aplastic anemia，AA)的發(fā)生和發(fā)展中，免疫調節(jié)紊亂尤其是免疫介導的T淋巴細胞異常免疫是導致造血功能衰竭的重要病理機制。本研究通過觀察免疫介導再生障礙性貧血(AA)小鼠外周血單個核細胞(PBMC)中干擾素-γ(IFN-γ)、蛋白激酶C-θ(PKC-θ)表達及小鼠脾臟IFN-γ表達，探討PKC-θ與AA免疫發(fā)病機制的關系。
　　 方法：
　　 (1)采用免疫介導方法建立(60Co-γ射

2、線照射后輸入淋巴細胞)AA小鼠模型。
　　 將Balb/c小鼠給以60Co-γ射線5.5Gy全身照射。照射后2小時經小鼠尾靜脈輸入DBA/2小鼠胸腺、淋巴結混合細胞懸液(濃度5×106/ml)0.2ml。飼養(yǎng)于無菌環(huán)境下。瀕死或第12天取外周血進行血常規(guī)和網織紅細胞檢查，并進行骨髓活檢，判定模型成功與否。
　　 (2)造模成功后，用逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)法檢測小鼠外周血單個核細胞中IFN-γmRNA的表達，

3、對結果進行半定量分析。
　　 (3)用RT-PCR法檢測小鼠外周血單個核細胞中PKC-θmRNA的表達，對結果進行半定量分析。
　　 (4)對IFN-γmRNA和PKC-θmRNA的表達水平進行相關性分析。
　　 (5)對PKC-θmRNA的表達和外周血細胞數量進行相關性分析。
　　 (6)用免疫組織化學方法檢測AA小鼠脾臟組織石蠟切片中IFN-γ蛋白表達水平，以每個視野內的陽性細胞數量作為IFN-γ蛋白

4、的量化指標，進行陽性細胞率分析。
　　 (7)統計方法：所有資料處理用SPSS16.0軟件包進行分析，檢測結果以均數±標準差表示，經方差齊性檢驗后，用t檢驗比較兩組間的差異。用簡單直線相關分析探討兩因素之間相關關系。
　　 結果：
　　 (1)AA小鼠外周血常規(guī)及網織紅細胞檢測顯示全血細胞減少，骨髓活檢顯示骨髓造血細胞明顯減少，非造血細胞增多。造模成功。
　　 (2)RT-PCR結果顯示AA小鼠PBMC中

5、IFN-γmRNA表達高于正常小鼠(1.14±0.06vs0.73±0.11，P＜0.05)。
　　 (3)RT-PCR結果顯示AA小鼠PBMC中PKC-θmRNA表達高于正常小鼠(1.21±0.74vs0.48±0.48，P＜0.05)。
　　 (4)相關性分析顯示AA小鼠PBMC中IFN-γ與PKC-θ表達呈正相關(r值0.655，P＜0.05)。
　　 (5)相關性分析顯示AA小鼠PKC-θmRNA與WBC

6、、PLT、RC表達呈負相關(r值分別為-0.657、-0.714和-0.766)，有統計學意義(P值均＜0.05)；PKC-θmRNA與RBC、Hb表達無明顯線性關系。
　　 (6)免疫組化結果顯示AA小鼠脾臟組織中IFN-γ蛋白陽性率(4.55±0.60)％高于正常小鼠(0.82±0.25)％，有統計學意義(P＜0.01)。
　　 結論：AA小鼠PBMC中IFN-γmRNA和PKC-θmRNA表達均增高，AA小鼠脾臟組