介導(dǎo)再生障礙性貧血免疫造血抑制關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)域研究.pdf

1、第一部分:造血干/祖細(xì)胞增殖抑制模型的建立;目的:自臍血分選CD<,34><'+>細(xì)胞,在體外對(duì)其進(jìn)行擴(kuò)增從而建立造血干/祖細(xì)胞增殖模型;觀察SAA血清對(duì)CD<,34><'+>干/祖細(xì)胞增殖能力的影響并建立其抑制模型.結(jié)論:以磁性分選器可分離純化濃度較高的CD<,34><'+>干/祖細(xì)胞,SCF、flt<,3>L、TPO等細(xì)胞因子組合可對(duì)其進(jìn)行體外擴(kuò)增,SAA血清在體外對(duì)CD<,34><'+>干/祖細(xì)胞的CFU-GM形成能力有抑制作用.

2、從而建立了造血干/祖細(xì)胞增殖抑制模型,為后續(xù)研究奠定基礎(chǔ).第二部分:介導(dǎo)AA免疫造血抑制關(guān)鍵性CyclinD亞型的研究;目的:確定調(diào)控造血干細(xì)胞增殖的關(guān)鍵性Cyclin D亞型及調(diào)控方式,并觀察SAA血清對(duì)其抑制效應(yīng).結(jié)論:Cyclin D調(diào)控主要發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平,介導(dǎo)AA免疫造血抑制活性關(guān)鍵Cyclin D亞型為Cyclin D<,3>,AA血清對(duì)其具有抑制作用,這可能是AA發(fā)病的機(jī)制之一.第三部分:克隆CyclinD<,3>基因啟動(dòng)子

3、,構(gòu)建報(bào)導(dǎo)基因載體;目的:克隆不同長度的Cyclin D<,3>基因啟動(dòng)子片段,連入PGL<,3>-Basic熒光素酶報(bào)導(dǎo)基因載體,得到橫跨不同長度的一系列Cyclin D<,3>基因啟動(dòng)子質(zhì)粒,為研究啟動(dòng)子活性區(qū)域提供了基礎(chǔ).結(jié)論:Cyclin D<,3>基因啟動(dòng)子質(zhì)粒構(gòu)建成功,且均有活性.第四部分:確定Cyclin D<,3>基因啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)域;目的:確定Cyclin D<,3>基因啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)域并觀察SAA血清對(duì)該區(qū)域活性