低氧預(yù)處理促進(jìn)表皮細(xì)胞趨電性遷移的研究.pdf

1、背景：
　　表皮細(xì)胞有效地向創(chuàng)面中心遷移是創(chuàng)面愈合過(guò)程中的關(guān)鍵步驟。表皮細(xì)胞要實(shí)現(xiàn)向創(chuàng)面中心快速有效地遷移，就需要知道遷移的方向。創(chuàng)面內(nèi)源性的直流電場(chǎng)作為一個(gè)重要的方向信號(hào)指導(dǎo)表皮細(xì)胞有效地向創(chuàng)面中心的遷移。創(chuàng)面內(nèi)源性的直流電場(chǎng)是皮膚創(chuàng)面形成時(shí)皮膚屏障破壞、跨上皮電勢(shì)差消失所產(chǎn)生，創(chuàng)面中心為電場(chǎng)的負(fù)極，創(chuàng)緣為電場(chǎng)的正極，此電場(chǎng)一直持續(xù)到創(chuàng)面完全再上皮化后才消失。以往研究表明內(nèi)源性的直流電場(chǎng)強(qiáng)度為42-100mV/mm，并且隨著時(shí)間

2、和空間在不斷變化。在體外，生理強(qiáng)度的直流電場(chǎng)能夠指導(dǎo)多種細(xì)胞朝著一定的方向遷移，稱之為趨電性。表皮細(xì)胞在直流電場(chǎng)中從正極向負(fù)極遷移，這跟在體表皮細(xì)胞在內(nèi)源性直流電場(chǎng)中遷移的方向一致。更有意義的是最新的研究顯示電場(chǎng)是上皮創(chuàng)面愈合過(guò)程中最重要的方向信號(hào)，這表明電場(chǎng)在創(chuàng)面愈合過(guò)程中所起的作用比以往的認(rèn)識(shí)更加重要。
　　然而創(chuàng)面微環(huán)境是復(fù)雜的。表皮細(xì)胞向創(chuàng)面中心的遷移，除了電場(chǎng)，可能還受到同時(shí)存在于創(chuàng)面微環(huán)境中的其他因素的影響。這些因素會(huì)

3、對(duì)創(chuàng)面表皮細(xì)胞方向性的遷移產(chǎn)生什么樣的影響還不得而知。盡管一些細(xì)胞膜蛋白和胞漿蛋白已經(jīng)被證實(shí)是表皮細(xì)胞趨電性遷移的分子機(jī)制，但是創(chuàng)面微環(huán)境中的其他因素是否通過(guò)影響這些分子來(lái)影響表皮細(xì)胞趨電性遷移還不得而知。創(chuàng)面形成后由于局部血液循環(huán)障礙和創(chuàng)周細(xì)胞氧耗的增加，導(dǎo)致創(chuàng)面形成低氧的微環(huán)境。研究表明，在創(chuàng)面中心處氧分壓最低，為0-10mmHg（0-1.3％ O2），離創(chuàng)緣越近氧分壓越高，在創(chuàng)緣處氧分壓大約為60mmHg（7.9% O2）。創(chuàng)面形

4、成后表皮細(xì)胞沒(méi)有立即開(kāi)始遷移，而是在幾個(gè)小時(shí)以后才開(kāi)始遷移，低氧可能在表皮細(xì)胞遷移的啟動(dòng)中起著重要作用。事實(shí)上，低氧已經(jīng)被證明能夠增強(qiáng)表皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)性，并且在創(chuàng)面的再上皮化中起著重要的作用。創(chuàng)面的再上皮化不僅依賴于表皮細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)，更重要的是表皮細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的方向。然而，低氧是否會(huì)對(duì)創(chuàng)面愈合過(guò)程表皮細(xì)胞方向性的遷移產(chǎn)生影響還未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。大量的研究描述了表皮細(xì)胞趨電性的遷移，然而這些研究都是在常氧條件進(jìn)行的，都忽略了在體表皮細(xì)胞開(kāi)

5、始遷移之前已經(jīng)存在的創(chuàng)面低氧微環(huán)境。
　　目的：
　　本課題旨在研究低氧預(yù)處理對(duì)原代小鼠表皮細(xì)胞趨電性遷移的影響及其機(jī)制，進(jìn)一步認(rèn)識(shí)創(chuàng)面低氧微環(huán)境促進(jìn)創(chuàng)面愈合的機(jī)制，為臨床上探索進(jìn)一步促進(jìn)創(chuàng)面愈合的治療新方法提供新思路。
　　內(nèi)容與方法：
　　1、建立外加直流電場(chǎng)誘導(dǎo)表皮細(xì)胞趨電性遷移的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，觀察常氧條件下原代小鼠表皮細(xì)胞趨電性遷移特征。
　　2、對(duì)比觀察不同濃度的低氧預(yù)處理對(duì)原代小鼠表皮細(xì)胞趨電性遷移

6、特征的影響。
　　3、對(duì)比觀察不同時(shí)間的低氧預(yù)處理對(duì)原代小鼠表皮細(xì)胞趨電性遷移的影響。
　　4、對(duì)比觀察低氧預(yù)處理對(duì)電場(chǎng)刺激條件下單層表皮細(xì)胞創(chuàng)面愈合及表皮細(xì)胞趨電性遷移的影響。
　　5、檢測(cè)低氧預(yù)處理對(duì)細(xì)胞內(nèi)ROS水平變化的影響;明確ROS在低氧預(yù)處理促進(jìn)表皮細(xì)胞趨電性遷移中的作用，初步闡明低氧預(yù)處理影響表皮細(xì)胞趨電性遷移的機(jī)制。
　　結(jié)果：
　　1、通過(guò)我們建立的科學(xué)、實(shí)用、可實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)觀察外加直流電場(chǎng)下

7、細(xì)胞遷移的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停l(fā)現(xiàn)原代小鼠表皮細(xì)胞的趨電性遷移呈外加電場(chǎng)的電壓和時(shí)間依賴性。在常氧條件下原代小鼠表皮細(xì)胞趨電性遷移的電壓閾值為大于25mV/mm、小于50mV/mm。
　　2、低氧預(yù)處理能夠促進(jìn)表皮細(xì)胞趨電性遷移，此促進(jìn)作用呈氧濃度和預(yù)處理時(shí)間依賴性，其中以6小時(shí)2%的低氧預(yù)處理的促進(jìn)作用最明顯。6小時(shí)2%的低氧預(yù)處理能增強(qiáng)表皮細(xì)胞趨電敏感性，降低表皮細(xì)胞趨電性電壓閾值（從常氧條件下的25mV/mm至50mV/mm之間降低到

8、<25mV/mm）。然而，12小時(shí)2%的低氧預(yù)處理導(dǎo)致表皮細(xì)胞趨電性遷移受抑，這一抑制作用可能與長(zhǎng)時(shí)間低氧預(yù)處理降低表皮細(xì)胞的活性有關(guān)。
　　3、低氧預(yù)處理能促進(jìn)電場(chǎng)刺激條件下單層表皮細(xì)胞創(chuàng)面愈合，該促進(jìn)作用大于單獨(dú)低氧預(yù)處理與單獨(dú)外加電場(chǎng)對(duì)創(chuàng)面愈合的促進(jìn)作用之和。
　　4、ROS是電場(chǎng)誘導(dǎo)表皮細(xì)胞方向性遷移的必需信號(hào)分子，但不是表皮細(xì)胞運(yùn)動(dòng)所必需的的。低氧預(yù)處理通過(guò)增加細(xì)胞內(nèi)ROS的生成促進(jìn)了表皮細(xì)胞趨電性遷移。
　

9、　結(jié)論：
　　本研究在建立科學(xué)、實(shí)用、可實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)觀察外加直流電場(chǎng)誘導(dǎo)表皮細(xì)胞趨電性遷移實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷幕A(chǔ)上，發(fā)現(xiàn)低氧預(yù)處理通過(guò)增加細(xì)胞內(nèi)ROS生成促進(jìn)表皮細(xì)胞趨電性遷移，此促進(jìn)作用呈低氧預(yù)處理時(shí)間和氧濃度依賴性，其中以6小時(shí)2%的低氧預(yù)處理對(duì)表皮細(xì)胞趨電性遷移的促進(jìn)作用最為明顯，且該低氧預(yù)處理?xiàng)l件能顯著促進(jìn)電場(chǎng)刺激的單層表皮細(xì)胞創(chuàng)面愈合過(guò)程，研究進(jìn)一步揭示了對(duì)創(chuàng)面低氧微環(huán)境促進(jìn)創(chuàng)面愈合的作用機(jī)制，為臨床探索促進(jìn)創(chuàng)面愈合的新技術(shù)、新方法