腦膜瘤細胞原代培養(yǎng)和羥基脲體外抑瘤實驗的研究.pdf

1、浙江大學碩士學位論文腦膜瘤細胞原代培養(yǎng)和羥基脲體外抑瘤實驗的研究姓名：楊樹旭申請學位級別：碩士專業(yè)：外科學（神經(jīng)外科）指導教師：甘海鵬;王義榮2002.5.1■●’浙江大學碩士學位論文瘸，或者預防腦膜瘤術(shù)后復發(fā)提供理論根據(jù)。＼ f 材料與方法：I ．U ．腦膜瘤細胞標本的制作新鮮的腦膜瘤組織塊取自2 3 例腦膜瘤患者，應用機械分散法分離細胞，用剪刀將腦膜癌組織塊剪成碎片，并將組織放在注射器內(nèi)反復壓出，用吸管反復吹打分數(shù)組織細胞，再去除纖

2、維條索，制成細胞懸液。鏡檢細胞計數(shù)，然后接種培養(yǎng)。2 ．細胞培養(yǎng)術(shù)中取人體腦膜瘤標本，機械分散法分離細胞。在R P M I l 6 4 0 培養(yǎng)基( 加1 嘶胎牛血清) 、5 ％c 0 2 、3 7 0 c 條件下培養(yǎng)。每隔一至二天換培養(yǎng)液，細胞長滿后用0 ．2 5 ％臃蛋白酶消化傳代，傳代4 8 小時后分別在不含羥基腮、含羥基腮5 x 1 0 - 3 M 、5 x l c r 4 M 、5 ×1 0 “ 5 M的培養(yǎng)基中培養(yǎng)

3、。每隔一至二天換培養(yǎng)液，持束加藥組細胞長滿或接近長滿時終止培養(yǎng)，進行細胞計數(shù)、M T F 及流式細胞儀檢測。3 ．常規(guī)病理及免疫組化檢查’手術(shù)標本送常規(guī)病理檢查及E n - v i s i o n 免疫組化染色法檢測S 1 0 0 蛋白、上皮膜抗原( E M A ) 、波形蛋白( V i m m 6 n ) ，原代培養(yǎng)細胞應用E n - v i s i o n 免疫組化染色法檢測$ 1 0 0蛋白、上皮膜抗原( E M A ) 、波形蛋

4、白( V u n e n t m ) 。4 ．細胞形態(tài)學．在培養(yǎng)狀態(tài)下，用倒置顯微鏡觀察細胞并詳細記錄細胞生長狀況和形態(tài)學改變。觀察加藥前后及不同藥物濃度組細胞形態(tài)的不同。5 ．細胞計數(shù)2 4 孔培養(yǎng)板培養(yǎng)，臺盼蘭染色，應用血球計數(shù)板計數(shù)活細胞。6 ．流式細胞僅檢測2 4 孔培養(yǎng)板中培養(yǎng)7 ～9 天，各孔換入5 0 0 u l D M E M 培養(yǎng)基( 含1 ．S m M C a C l 2 ) ，加入5 u la l m e x i