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文檔簡介
1、目的 建立骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 (mesenchymal stem cells MSCs) 培養(yǎng)、擴(kuò)增與鑒定及外周血T淋巴細(xì)胞分離、純化的方法;觀察MSCs及上清對T淋巴細(xì)胞增殖及分泌IL-4、IFN-γ的影響;MSCs對T淋巴細(xì)胞增殖影響的可逆性研究;MSCs對T淋巴細(xì)胞殺傷K562細(xì)胞的影響并探討可能機(jī)制。 方法 密度梯度離心法分離出單個(gè)核細(xì)胞,細(xì)胞貼壁法培養(yǎng)并擴(kuò)增MSCs,倒置相差顯微鏡觀察MSCs細(xì)胞形態(tài),流
2、式細(xì)胞術(shù)檢測MSCs表面抗原、地塞米松誘導(dǎo)MSCs向脂肪細(xì)胞分化;尼龍棉柱法從外周血分選出T淋巴細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行鑒定;MTT法測定MSCs對T淋巴細(xì)胞增殖的影響,ELISA法檢測反應(yīng)體系中IFN-γ、IL-4的分泌:MTT法測定MSCs對T淋巴細(xì)胞增殖影響的可逆性;LOH法檢測T淋巴細(xì)胞對K562細(xì)胞的殺傷,ELISA法檢測反應(yīng)體系IFN-γ、IL-4的分泌,流式細(xì)胞術(shù)檢測CD4<'+>、CD8<'+>、CD4<'+>CD25<'+
3、>T淋巴細(xì)胞的比例。 結(jié)果 MSCs形態(tài)均勻一致,生長曲線顯示增殖能力強(qiáng),流式細(xì)胞儀檢測顯示CD44、CD13高表達(dá),經(jīng)地塞米松誘導(dǎo)后MSCs向脂肪細(xì)胞分化,尼龍棉柱法分離的單個(gè)核細(xì)胞其CD3陽性細(xì)胞高表達(dá);MSCs及上清對T淋巴細(xì)胞增殖表現(xiàn)為抑制效應(yīng);MSCs及上清抑制T淋巴細(xì)胞IFN-γ的分泌,MSCs促進(jìn)T淋巴細(xì)胞IL-4的分泌,上清本身并不能促進(jìn)IL-4分泌;MSCs對T淋巴細(xì)胞增殖抑制具有可逆性;MSCs處理的
4、T淋巴細(xì)胞CD4<'+>、CD4<'+>CD25<'+>亞群升高,MSCs減弱了T淋巴細(xì)胞對K562細(xì)胞的殺傷效應(yīng),同時(shí)IFN-γ分泌減少、IL-4分泌增加。 結(jié)論 本實(shí)驗(yàn)獲得性能可靠的MSCs及T淋巴細(xì)胞;MSCs及上清對T淋巴細(xì)胞增殖表現(xiàn)為抑制效應(yīng),其作用機(jī)制可能包括直接接觸及分泌細(xì)胞因子兩種途徑;MSCs及上清抑制T淋巴細(xì)胞IFN-γ的分泌,MSCs卻促進(jìn)T淋巴細(xì)胞IL-4的分泌,MSCs可能通過改變T淋巴細(xì)胞分泌
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