抑癌基因RASSF1A聯(lián)合突變型K-Ras在鼻咽癌發(fā)病機制中的實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:研究抑癌基因RASSF1A在鼻咽癌中的表達及作用機制，并探討其與突變型K-Ras基因的關(guān)系。
　　 方法:采用RT-PCR半定量檢測在鼻咽癌細胞系、原發(fā)鼻咽癌組織及慢性鼻咽炎組織中RASSF1A基因的表達水平；通過構(gòu)建人RASSF1A基因的真核表達載體pcDNA3.1(+)/RASSF1A，利用脂質(zhì)體Lipofectamine2000將構(gòu)建好的人RASSF1A基因的真核表達載體pcDNA3.1(+)/RASSF1A和pcD

2、NA3.1(+)轉(zhuǎn)染入人鼻咽癌細胞株CNE-2中，采用RT-PCR，Western-blot檢測RASSF1A的瞬時表達，通過流式細胞儀檢測瞬時轉(zhuǎn)染該基因?qū)毎芷诘挠绊懸约笆欠裾T發(fā)細胞凋亡；將突變型K-Ras的表達載體pCGN-HA-RasG12V與RASSF1A共轉(zhuǎn)染入人鼻咽癌細胞株CNE-2中，流式細胞儀檢測外源性K-Ras的導(dǎo)入對細胞凋亡的影響，以及臺盼藍染色檢測RASSF1A單轉(zhuǎn)染和RASSF1A與K-Ras共轉(zhuǎn)染對細胞增殖能

3、力的影響。
　　 結(jié)果: RASSF1A在鼻咽癌細胞系中存在低表達，其在原發(fā)鼻咽癌組織中的表達水平明顯低于慢性鼻咽炎組織(P＜0.01)； RT-PCR及Western-blot結(jié)果證實轉(zhuǎn)染細胞的RASSF1A表達水平明顯上調(diào)；瞬時轉(zhuǎn)染RASSF1A后可使細胞周期阻滯在G0/G1期(P＜0.01)，同時誘導(dǎo)細胞凋亡和增殖抑制；共轉(zhuǎn)染結(jié)果證實突變型K-Ras能夠顯著增強RASSF1A誘導(dǎo)的細胞凋亡和增殖抑制效應(yīng)。
　　 結(jié)

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