NSE、S100 mRNA和蛋白水平與中醫(yī)藥治療急性腦出血最佳臨界出血量相關(guān)性的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的: 任繼學(xué)教授主持的“八五”攻關(guān)項(xiàng)目《中醫(yī)藥治療急性出血性中風(fēng)的實(shí)驗(yàn)與臨床研究》已經(jīng)證實(shí)，在出血量<50ml，排除腦干、小腦出血的情況下，中醫(yī)藥治療急性腦出血較西醫(yī)常規(guī)治療療效顯著。因此初步確定中醫(yī)藥治療急性腦出血的臨界出血量為<50ml，但50ml以下不同出血量之間中醫(yī)藥療效的有效率和顯效率差異較大。本課題即是在此基礎(chǔ)上，通過測定不同出血量的NSE、S100含量變化，探討其與出血量、腦組織損傷情況的關(guān)系，以期能夠初步確定中醫(yī)藥治療

2、腦出血急性期的最佳出血量，初步確立能夠輔助診斷腦出血的臨床新指標(biāo)，為最佳中醫(yī)內(nèi)科保守診治標(biāo)準(zhǔn)的確立奠定基礎(chǔ)。 方法：建立大鼠腦出血模型，通過對腦出血模型大鼠中藥干預(yù)與否的不同來進(jìn)行以下幾個(gè)方面的觀察：（1）大鼠神經(jīng)功能缺損評分，觀測大鼠神經(jīng)功能改變。（2）NSE和S100血清值通過ELISA檢測；（3）免疫組化ABC法檢測NSE和S100在腦組織的陽性表達(dá)，陽性細(xì)胞染色呈棕黃色；（4）運(yùn)用RT-PCR檢測NSE和S100各自mR

3、NA在腦組織的表達(dá)。 結(jié)果：（1）術(shù)后1天，模型組，給藥組在各出血量情況下神經(jīng)功能缺損評分比較沒有差別（P>0.05），但均高于假手術(shù)組，有明顯差異（P<0.01）。給藥組與模型組在不同出血量情況下，神經(jīng)功能缺損評分隨出血量的增多而呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢。術(shù)后3天，給藥組各出血量組評分均少于模型組（P<0.05）。（2）術(shù)后3天大鼠血清NSE水平，模型組高于假手術(shù)組，給藥組療效均好于模型組，特別是27ul（P<0.01）和40ul（

4、P<0.01）。給藥組的27ul和40ul出血量組血清NSE水平明顯降低，與模型組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；模型組內(nèi)比較，血清NSE水平27ul與40ul、53ul、67ul比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）,40ul、53ul和67ul之間比較無顯著差別（P>0.05）；術(shù)后3天大鼠血清S100水平，模型組高于假手術(shù)組，給藥組（53ul、67ul）高于假手術(shù)組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。給藥組療效均好于模型組，特別是27ul和40ul組（P<0.01）。

5、模型組內(nèi)比較，血清S100水平27ul與40ul、53ul、67ul比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）,40ul、53ul和67ul之間比較無顯著差別（P>0.05）。給藥組的27ul和40ul出血量組血清S100水平明顯降低。（3）血清NSE和S100的ROC曲線分析提示將血清NSE作為反映腦出血腦損傷達(dá)到不可逆程度的診斷界值初步定為19.95ng/ml至21.65ng/ml；血清S100作為腦出血后腦損傷達(dá)到不可逆程度的診斷界值初步

6、定為6.3ng/ml至8.16ng/ml；NSE和S100曲線下面積比較無差異。（4）腦出血后血腫周圍細(xì)胞病理形態(tài)發(fā)生了病變，表現(xiàn)為出血的損傷修復(fù)過程，出血灶周圍存在腦缺血改變。中藥干預(yù)對出血灶周圍組織有治療作用，能明顯的加速血腫吸收、減輕水腫，促進(jìn)毛細(xì)血管、膠質(zhì)細(xì)胞和膠原纖維增生，減輕缺血性損害。（5）NSE蛋白免疫組化結(jié)果提示給藥組較模型組在各個(gè)出血量情況下，免疫反應(yīng)均減弱；以小量出血組（27ul、40ul）更為明顯。腦組織NSE表

7、達(dá)的灰度值，模型組平均灰度值與假手術(shù)組比較有顯著差異（P<0.05-0.01）；給藥組與模型組平均灰度值比較均有顯著性差異（P<0.05-0.01）。S100蛋白的免疫組化結(jié)果提示治療組各個(gè)出血量組的染色均深于假手術(shù)組，與對照組相比，有所變淺，以小量出血組（27ul、40ul）更為明顯。腦組織S100表達(dá)的灰度值，模型組平均灰度值與假手術(shù)組比較有顯著差異（P<0.01）；給藥組與模型組平均灰度值比較均有顯著性差異（P<0.05-0.01

8、）。（6）S100 mRNA的測定結(jié)果顯示S100擴(kuò)增產(chǎn)物片段與預(yù)期長度相符，腦出血后模型組S100 mRNA的表達(dá)較假手術(shù)組明顯升高（P<0.01），給藥組S100 mRNA的表達(dá)與假手術(shù)組相比無差別。給藥組和模型組對比，S100 mRNA的表達(dá)均有所降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。模型組內(nèi)比較，27ul和40ulS100 mRNA的表達(dá)無差別，均低于53ul和67ul，53ul與67ul組S100 mRNA的表達(dá)無差別。 結(jié)論:（1）本

9、實(shí)驗(yàn)所選用的動(dòng)物模型，操作簡單，重復(fù)性好，能夠應(yīng)用該模型進(jìn)行課題的研究。以前囟為0點(diǎn)，前囟前0.4mm，中線旁開3mm，顱骨表面下6mm的定位點(diǎn)造成的神經(jīng)功能缺損最明顯，血腫形態(tài)及位置最接近基底節(jié)，未發(fā)生破入腦室的情況，能夠做為實(shí)驗(yàn)研究的最佳定位點(diǎn)。（2）中藥干預(yù)能明顯改善腦出血大鼠神經(jīng)功能缺損癥狀；血清NSE、S100水平能夠作為反映腦出血后腦損傷程度的敏感指標(biāo)。（3）中藥干預(yù)能夠調(diào)控腦出血大鼠血清NSE、S100水平；初步揭示中醫(yī)藥

10、治療腦出血在40ul（人腦30ml）以內(nèi)是安全，有效的。（4）血清NSE做為腦出血后腦損傷達(dá)到不可逆程度的診斷界值初步定為19.95ng/ml-21.65ng/ml；血清S100腦出血后腦損傷達(dá)到不可逆程度的診斷界值初步定為6.3ng/ml-8.16ng/ml。（5）中藥干預(yù)能明顯改善腦出血大鼠局部的組織病理學(xué)改變，免疫組化證實(shí)中藥干預(yù)能明顯減輕腦組織損傷，腦組織NSE、S100灰度值的變化隨出血量的增加呈逐漸上升趨勢，但是達(dá)到一個(gè)臨界

11、值后，就不再上升，反映在腦出血達(dá)到一定程度的時(shí)候，有一個(gè)臨床腦損傷的臨界點(diǎn)。中藥干預(yù)能調(diào)節(jié)S100 mRNA的表達(dá)，同時(shí)，隨著出血量的增加而逐漸升高，但是達(dá)到一個(gè)峰值之后，就不再上升，此峰值在40ul和53ul之間，與免疫組化的結(jié)果相符合。（6）NSE在腦組織的表達(dá)很微弱或是不表達(dá)，結(jié)合免疫組化結(jié)果推斷，腦出血后NSE蛋白在損傷局部的升高是由于腦出血后多種原因?qū)е律窠?jīng)元細(xì)胞死亡，NSE蛋白的滲漏所致；從而進(jìn)一步推斷NSE比S100更能直