腎移植受者TPMT和ITPA基因多態(tài)性與硫唑嘌呤所致不良反應(yīng)關(guān)系的研究.pdf

1、臨床上硫唑嘌呤（AZA）常用于急性白血病、器官移植和一些自身免疫疾病的治療。由于該藥可產(chǎn)生嚴(yán)重的甚至可危及生命的血液毒性、肝臟損害和胃腸紊亂等不良反應(yīng)，導(dǎo)致治療的被迫中斷甚至治療失敗，故其合理使用在臨床上倍受關(guān)注。研究發(fā)現(xiàn)，硫嘌呤甲基轉(zhuǎn)移酶（TPMT）和三磷酸肌苷焦磷酸酶（ITPA）都與AZA的代謝有關(guān)，由于控制TPMT和ITPA的基因具有遺傳多態(tài)性，使AZA在人群中的代謝呈現(xiàn)明顯的多態(tài)性，進(jìn)而使不同個(gè)體藥物的作用強(qiáng)度和毒性亦不同。因此

2、，在器官移植患者中，研究TPMT和ITPA基因多態(tài)性與AZA所致不良反應(yīng)的關(guān)系，有助于實(shí)現(xiàn)AZA用藥個(gè)體化，避免產(chǎn)生嚴(yán)重的不良反應(yīng)。 本研究征選155例服用或曾經(jīng)服用過(guò)AZA的腎移植受者做為研究對(duì)象，建立了新的高效液相色譜法（HPLC）熒光檢測(cè)其紅細(xì)胞TPMT活性，確定TPMT活性分布。采用等位基因特異性的PCR和限制性片斷長(zhǎng)度多態(tài)性（PCR-RFLP）的方法，檢測(cè)了TPMT*2、TPMT*3A、TPMT*3B和TPMT*3C的

3、基因突變頻率。此外，本研究以健康受試者為研究對(duì)象，考察了環(huán)孢素、氫化可的松和硝苯地平等腎移植受者常用藥物對(duì)TPMT活性的影響。另一方面，本研究建立了新的HPLC法檢測(cè)這155例腎移植受者紅細(xì)胞ITPA活性，確定ITPA活性分布。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和PCR-RFLP法檢測(cè)了ITPA 94C>A和IVS2+21A>C的基因突變頻率。在此基礎(chǔ)上，結(jié)合這155例腎移植受者發(fā)生不良反應(yīng)的情況，系統(tǒng)地分析了TPMT和ITPA活性和基因多態(tài)性與A

4、ZA所致不良反應(yīng)的關(guān)系。 本研究結(jié)果顯示，155例患者TPMT活性范圍為13.04～68.25U，平均活性為（36.00±12.32）U，呈正態(tài)分布。30例患者（19.4％）顯示TPMT中等活性，未發(fā)現(xiàn)TPMT低活性或該酶活性缺乏者。共發(fā)現(xiàn)7例TPMT*3C突變基因雜合子個(gè)體，其突變頻率為2.26％，7例患者均表現(xiàn)為中等TPMT活性，說(shuō)明TPMT*3C基因突變可導(dǎo)致TPMT活性的降低。在體外，環(huán)孢素、氫化可的松、卡托普利以及別嘌

5、呤醇，對(duì)TPMT活性抑制作用較弱。硝苯地平能明顯抑制TPMT的活性，中等活性組的平均IC50值為（24.37±16.64）μg·mL-1，正?；钚越M的平均IC50值為（11.81±10.03）μg·mL-1。155例腎移植受者ITPA活性范圍為0～191.2U，平均為（96.1±37.1）U，呈雙峰分布。3例ITPA活性為0U的患者為ITPA活性缺乏者，其ITPA基因型為94C>A突變基因純合子。另外發(fā)現(xiàn)31例ITPA 94C>A 突變

6、基因雜合子個(gè)體均為ITPA低活性患者（<70U）。ITPA 94C>A突變頻率為11.9％，本研究未發(fā)現(xiàn)ITPA IVS2+21A>C突變基因。ITPA 94C>A基因突變是導(dǎo)致ITPA活性降低的主要因素。 155例腎移植受者中，120例患者未發(fā)生不良反應(yīng)，將其作為對(duì)照組，平均TPMT活性為（37.26±11.60）U，平均ITPA活性為（97.9±34.7）U。另外35例患者由于發(fā)生了不良反應(yīng)而停用AZA或減少了AZA的劑量。

7、其中12例患者產(chǎn)生了血液毒性，平均TPMT活性為（22.92±10.67）U，明顯低于對(duì)照組（t檢驗(yàn)，P<0.05），其中僅2例患者為TPMT*3C突變基因雜合子，AZA所致的血液毒性主要與患者紅細(xì)胞TPMT活性低下有關(guān)。18例患者產(chǎn)生了肝臟毒性，其TPMT和ITPA活性離散度較大，其均值分別與對(duì)照組比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t檢驗(yàn)，P>0.05）。其中僅發(fā)現(xiàn)2例TPMT*3C和4例ITPA 94C>A突變基因雜合子，TPMT和ITPA活性和

8、基因多態(tài)性與AZA所致的肝臟毒性無(wú)明顯相關(guān)性。5例患者產(chǎn)生了胃腸紊亂癥狀（包括1例患者同時(shí)產(chǎn)生了肝臟毒性），其中有2例患者ITPA活性缺乏，為ITPA 94C>A突變基因純合子，另外3例患者ITPA活性較低，為ITPA 94C>A突變基因雜合子。剩余1例患者出現(xiàn)了流感樣癥狀，ITPA活性缺乏，為ITPA 94C>A突變基因純合子。ITPA活性缺乏或ITPA 94C>A基因突變純合子患者極易發(fā)生AZA所致胃腸紊亂癥狀和流感樣癥狀的不良反應(yīng)