布地奈德干預對哮喘小鼠肺組織中IL-17和RORγt mRNA表達水平的影響.pdf

1、目的：通過研究哮喘模型外周血中Th17細胞百分率及肺泡灌洗液中IL-17水平、肺組織RORγt mRNA表達水平，以及給予布地奈德干預治療后的影響，來探討支氣管哮喘的發(fā)病和治療機制。
　　方法：健康雌性Ba1b/c純系小鼠(徐州醫(yī)學院實驗動物中心提供)30只，6-8周齡，體重22-24g，普通級，按隨機數(shù)字表法分為3組(每組10只)：(1)模型組及BUD治療組：均于第0、7、14天給予OVA/Al(OH)3混合液0.2ml(內(nèi)含O

2、VA100μg，Al(OH)31mg)腹腔注射(i.p.，intraperitoneal)，第2l-26天每天將小鼠置于5L密閉容器中以2％的OVA生理鹽水(NS，normal saline)溶液10ml霧化吸入激發(fā)30min或出現(xiàn)哮喘樣發(fā)作為止。另外，治療組于第0、1、7天及每次霧化前給予布地奈德霧化液5ml(含BUDlmg)，每次30min。(2)對照組則在致敏階段以Al(OH)3替代OVA/Al(OH)3腹腔注射，在激發(fā)階段以NS

3、替代OVA霧化。各組于最后一次激發(fā)24h，即第27天處死動物進行各項檢測。采用HE染色評價各組小鼠氣道炎癥程度；流式細胞術(shù)(FCM)檢測各組小鼠外周血中Th17細胞數(shù)量的動態(tài)變化；酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)技術(shù)檢測小鼠肺泡灌洗液(BALF)、血清中白細胞介素-17(IL-17)水平；逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)方法檢測肺組織RORγtmRNA表達水平。
　　結(jié)果：1.小鼠臨床表現(xiàn)及肺組織病理改變：模型組小鼠出現(xiàn)了煩躁不安

4、，頭面部抓撓，鼻扇，呼吸急促，前肢縮抬，反應遲鈍，步態(tài)不穩(wěn)，蛙跳等典型哮喘表現(xiàn)，嚴重者呼吸減慢或呼吸節(jié)律不整，口鼻輕度紫紺，四肢癱軟，行動遲滯或俯伏不動；連續(xù)激發(fā)后小鼠毛色失去光澤，取出動物可見遺留較多排泄物。治療組小鼠癥狀表現(xiàn)較輕，24小時內(nèi)精神，毛發(fā)，食欲均可獲得不同程度上的恢復；對照組小鼠一般情況良好。光鏡下，哮喘組小鼠肺泡間隔增寬，支氣管管腔變小，管壁增厚，小血管及細支氣管周圍可見到大量炎癥細胞浸潤；BUD治療組病理改變較模型組

5、輕；對照組小鼠細支氣管及肺泡結(jié)構(gòu)基本正常，無明顯炎癥細胞浸潤。2.小鼠外周血Th17細胞的百分率、占CD4+T細胞比例：模型組(5.09％±1.01％、22.66％±3.65％)明顯高于正常對照組(2.19%±0.21％、7.90%±0.61％)，均為P<0.01；BUD治療組(3.47％±0.77％、14.26±3.28％)比模型組降低，均為P<0.01。3.小鼠血清、肺泡灌洗液(BALF)中IL-17水平：模型組較對照組明顯增高(2

6、7.28±3.64pg/ml vs6.58±2.32 pg/ml，19.51±2.23 pg/ml vs5.49±2.62 pg/ml均為P<0.01)，BUD治療組較模型組降低(12.04±2.28pg/ml vs27.28±3.64 pg/ml，9.82±1.94 pg/ml vs19.51±2.23 pg/ml，均為P<0.01)。4.小鼠肺組織中RORγt-actinmRNA比例：模型組(0.814±0.07)較對照組(0.33