減毒活菌卡介苗對(duì)哮喘模型IFN-γ、IL-13和IL-17表達(dá)的影響.pdf

1、目的：1、本研究通過對(duì)哮喘大鼠血清中IFN-γ、IL-13和IL-17水平的檢測，旨在探討Th1、Th2和Th17細(xì)胞在哮喘發(fā)病過程中的作用與機(jī)制。
　　 2、減毒活菌卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin BCG)作為干預(yù)因素，檢測分析血清IFN-γ、IL-13和IL-17各指標(biāo)差異及相關(guān)關(guān)系，為卡介苗對(duì)哮喘防治提供理論依據(jù)。
　　 方法：40只4周齡健康清潔級(jí)SD雄性大鼠，體重50-100g，隨機(jī)分

2、成5組：正常對(duì)照組、哮喘模型組、卡介苗單次預(yù)防接種組(BCG1組)、卡介苗多次預(yù)防接種組(BCG2組)、卡介苗多次干預(yù)治療組(BCG3組)，每組各8只。除正常對(duì)照組給予鹽水致敏外，其余組均于實(shí)驗(yàn)第1、8天對(duì)每只大鼠腹腔注射含有卵蛋白(OVA)和氫氧化鋁各100mg的鹽水2mL進(jìn)行致敏，第15天起將大鼠置于自制的密閉有機(jī)玻璃霧化箱內(nèi)，予含有2％OVA的生理鹽水5mL霧化吸入30min，1次/隔日，共激發(fā)20次，每次30min。BCG1組于

3、SD大鼠致敏前7天，BCG2組于SD大鼠致敏前7天、3天、1天給予BCG皮內(nèi)注射，之后給予OVA致敏并激發(fā)建立哮喘模型，BCG3組是于每次激發(fā)前給予哮喘模型皮內(nèi)注射BCG，于末次OVA激發(fā)后24小時(shí)內(nèi)取材。HE染色觀察各實(shí)驗(yàn)組肺組織病理變化；酶聯(lián)免疫雙抗體夾心(ELISE)法檢測血清中IL-13、IL-17、IFN-γ水平。所得數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。指標(biāo)測得的結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±S)表示，統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用方差

4、分析、直線相關(guān)分析，以p<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：1、HE染色觀察各實(shí)驗(yàn)組肺組織的病理變化：正常對(duì)照組：氣道上皮光滑完整，基底層、平滑肌層較薄，氣道、血管周圍炎癥細(xì)胞極少，并以巨噬細(xì)胞為主。哮喘模型組：氣道上皮不完整，且上皮細(xì)胞增生肥大，基底層、平滑基層增厚，收縮成菊花狀，氣道、血管周圍及肺泡隔內(nèi)大量炎性細(xì)胞浸潤，以嗜酸性粒細(xì)胞為主。BCG1組與BCG3組類似：氣道上皮細(xì)胞與基底層、平滑肌層厚度介于正常對(duì)照及哮喘模

5、型組之間，氣道、血管周圍嗜酸性粒細(xì)胞浸潤減少。BCG2組肺組織病理變化較BCG1、BCG3組更接近正常對(duì)照組，氣道上皮輕微受損，基底層、平滑基層略增厚，嗜酸性粒細(xì)胞浸潤明顯減少。
　　 2、ELISA檢測血清IFN-γ的水平(ng/ml)：哮喘模型組為10.92±1.93；BCG1組為18.20±1.73；BCG2組為22.664±2.05；BCG3組為18.46±1.48；正常對(duì)照組為30.36±3.65。進(jìn)行組間比較：五組間

6、比較差異有顯著性意義(F=76.587，p<0.05)。哮喘模型組明顯低于正常對(duì)照組及卡介苗處理組(p<0.05)，有顯著性差異；BCG1組與BCG3組比較p=0.821，無顯著性差異，與其余組比較p<0.05，有顯著性差異；BCG2組與其余各組比較p<0.05，均有顯著性差異；BCG3組與除BCG1組之外的其它組比較p<0.05，有顯著性差異。
　　 3、ELISA檢測血清IL-13的水平(ng/ml)：哮喘模型組為68.31

7、±7.20；BCG1組為51.31±3.25；BCG2組為38.94±5.87；BCG3組為53.39±3.74；正常對(duì)照組為24.79±5.90。進(jìn)行組間比較：五組間比較差異有顯著性意義(F=73.522，p<0.05)。哮喘模型組明顯高于正常對(duì)照組及卡介苗處理組(p<0.05)，有顯著性差異；BCG1組與BCG3組比較p=0.448，無顯著性差異，與其余組比較p<0.05，有顯著性差異；BCG2組與其余各組比較p<0.05，均有顯著

8、性差異；BCG3組與除BCG1組之外的其它組比較p<0.05，有顯著性差異。
　　 4、ELISA檢測血清IL-17的水平(ng/ml)：哮喘模型組為148.29±8.92；BCG1組為110.34±9.38；BCG2組為92.48±10.29；BCG3組為118.19±9.86；正常對(duì)照組為67.50±6.34。進(jìn)行組間比較：五組間比較差異有顯著性意義(F=87.912，p<0.05)。哮喘模型組明顯高于正常對(duì)照及卡介苗處理組

9、(p<0.05)，有顯著性差異；BCG1組與BCG3組比較p=0.092，無顯著性差異，與其余組比較p<0.05，有顯著性差異；BCG2組與其余各組比較p<0.05，均有顯著性差異；BCG3組與除BCG1組之外的其它組比較p<0.05，有顯著性差異。
　　 5、IL-13與IL-17相關(guān)性分析：實(shí)驗(yàn)測得的血清IL-13與IL-17兩者之間呈直線正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r=0.921，p<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 6、IL-1

10、3與IFN-γ相關(guān)性分析：實(shí)驗(yàn)測得的血清IL-13與IFN-γ兩者之間呈直線負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r=-0.908，p<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 7、IL-17與IFN-γ相關(guān)性分析：實(shí)驗(yàn)測得的血清IL-17與IFN-γ兩者之間呈直線負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r=-0.892，p<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：1、哮喘發(fā)病中存在Th1/Th2及其細(xì)胞因子的比例失衡，同時(shí)獨(dú)立于Th1和Th2之外的Th17細(xì)胞及其細(xì)胞因子也參與了