天津地區(qū)志賀菌腸毒素基因分布及其PFGE分型的研究.pdf

1、目的：
　　 研究天津地區(qū)2005～2007年分離的62株志賀菌，對所分離菌株進行生化鑒定、血清學分型和藥敏試驗，檢測腸毒素等毒力基因在志賀菌中的分布，并采用脈沖場凝膠電泳技術對分離的志賀菌進行分子分型，從而為本地區(qū)細菌性痢疾的防控工作提供重要依據(jù)。
　　 方法：
　　 1.經(jīng)全自動微生物生化鑒定儀對分離的62株菌株進行生化鑒定和藥敏試驗，采用玻片凝集試驗進行血清學分型。
　　 2.采用PCR方法檢測受試

2、菌株中侵襲性質?；騣paH以及腸毒素基因set1A，set1B和sen。
　　 3.選用XbaI限制性核酸內(nèi)切酶對62株志賀菌及標準株沙門菌Braenderup型H9812株染色體酶切后進行脈沖場凝膠電泳分子分型，應用Bionumerics軟件處理PFGE結果且繪制出聚類分析圖。
　　 結果：
　　 1.經(jīng)生化鑒定所分離菌株全部為志賀菌，其中福氏志賀菌36株，占58.06％，包括8種亞型，分別為福氏1a，福氏1

3、b，福氏2a，福氏2b，福氏3a，福氏4a，福氏6以及福氏X變種，占全部菌株比例依次為6.45％，6.45％，8.06％，17.74％，6.45％，8.06％，1.61％和3.23％。以福氏2b亞型為優(yōu)勢血清型，占福氏志賀菌株的30.56％；宋內(nèi)氏志賀菌26株，占41.94％。分離志賀菌均為多重耐藥株，絕大多數(shù)菌株對氨芐西林，復方新諾明和慶大霉素耐藥，但對喹喏酮類藥物較為敏感。
　　 2.根據(jù)文獻設計合成引物，采用PCR方法擴增

4、侵襲性質?；騣paH、以及腸毒素基因set1A、set1B和sen，其預期片段大小分別為309bp、147bp、799bp和423bp。62株志賀菌四種毒力基因PCR檢出率為ipaH95.16％（59/62株），set1A40.32％（25/62株），set1B37.10％（23/62株），sen50％（31/62株）。腸毒素基因set1A、set1B、sen分別在福氏2b、福氏2a以及福氏4a等主要血清型別志賀菌中的檢出率相對較高，

5、均可達到50％以上，其中在福氏2b中檢出率分別為90.91％、63.64％和90.91％，在福氏2a中檢出率分別為100％、80％和60％，在福氏4a中檢出率分別為100％、50％和100％；而在宋內(nèi)氏志賀菌中未檢出腸毒素基因set1A，set1B，sen的檢出率僅為11.54％。經(jīng)x2檢驗處理表明腸毒素基因set1A、set1B和sen在福氏志賀菌與宋內(nèi)氏志賀菌中的分布差別具有統(tǒng)計學意義（P<0.005）。31株sen基因陽性菌株的i

6、paH基因也均為陽性。36株福氏志賀菌腸毒素毒力基因顯示了6種不同的基因組合，尤以攜帶3種和2種不同基因的組合為主，占所有被檢福氏志賀菌的80.56％，其中set1A、set1B、sen三者并存的菌株為優(yōu)勢組合，占全部菌株的41.67％。
　　 3.62株志賀菌株的脈沖場凝膠電泳結果經(jīng)Bionumerics軟件分析獲得14種不同的型別。其中宋內(nèi)氏志賀菌帶譜為4種（SⅠ～SⅣ），福氏志賀菌帶譜為10種（FⅠ～FⅩ）。宋內(nèi)氏志賀菌中

7、SⅠ型有23株，又可分為兩種亞型，其余3種型別各1株。福氏志賀菌中FⅠ、FⅡ、FⅢ、FⅣ和FⅩ型各1株；FⅤ、FⅥ和FⅨ型各2株；FⅧ型共4株；FⅦ型21株，又可以分為6種主要亞型。
　　 結論：
　　 1.2005～2007年天津地區(qū)流行的志賀菌主要為福氏志賀菌和宋內(nèi)氏志賀菌，其中福氏2b為福氏志賀菌中的優(yōu)勢血清型。值得注意的是宋內(nèi)氏志賀菌呈上升趨勢。分離志賀菌均為多重耐藥菌株，但對喹喏酮類藥物敏感，可作為治療用藥參考

8、。
　　 2.志賀菌腸毒素基因set1A、set1B和sen在不同血清型的志賀菌中分布有明顯差異。set1A和set1B存在于福氏志賀菌多種血清型中，以福氏2b、福氏2a和福氏4a檢出率較高。sen廣泛分布于各型福氏志賀菌中，在宋內(nèi)氏志賀菌亦有少量分布。志賀菌腸毒素基因的多種組合提示腸毒素毒力因子之間可能存在一定的協(xié)同作用。
　　 3.天津地區(qū)流行的宋內(nèi)氏志賀菌可能源于親緣關系很近的克隆系（SⅠ基因型），福氏志賀菌PFG