三種常見醫(yī)院感染菌耐藥性及其PFGE基因分型研究.pdf

1、[目的]了解深圳市人民醫(yī)院三種常見醫(yī)院感染菌(大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌及糞腸球菌)的耐藥現(xiàn)狀；研究該院過去一年中大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)的檢出率及對常用抗生素的耐藥情況；通過脈沖場凝膠電泳與基因同源性分型分析，探討大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌及糞腸球菌醫(yī)院感染情況及進行病原溯源研究，為臨床合理應(yīng)用抗生素治療大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌及糞腸球菌引發(fā)的感染及其流行病學(xué)提供實驗依據(jù)和指導(dǎo)。 [方法]1.根據(jù)病

2、歷記錄與醫(yī)院感染監(jiān)測系統(tǒng)資料，收集從2004年9月到2005年5月期間深圳市人民醫(yī)院三種常見醫(yī)院感染菌(大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌及糞腸球菌)標(biāo)本并進行分離、鑒定。 2.深圳市人民醫(yī)院三種常見醫(yī)院感染菌(大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌及糞腸球菌)藥物敏感性測定： ①通過ESBLs初篩、確證試驗分析大腸埃希菌與肺炎克雷伯菌產(chǎn)ESBLs水平，了解其檢出率； ②應(yīng)用K-B法，測定大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌及糞腸球菌臨床分離株對常

3、用抗生素的耐藥性； ③對大腸埃希菌與肺炎克雷伯菌臨床分離株以產(chǎn)ESBLs與非產(chǎn)ESBLs菌株進行分類，并分析其對20種抗生素的耐藥差異。 3.利用脈沖場凝膠電泳(PFGE)技術(shù)建立以上三種常見醫(yī)院感染菌電泳圖譜庫。 4.利用凝膠成像系統(tǒng)和FingerprintingⅡ軟件對以上三種常見醫(yī)院感染菌的PFGE電泳圖譜進行聚類分析，并進行基因同源性分析。 [結(jié)果]1.經(jīng)過VITEKAMS60全自動微生物分析系統(tǒng)

4、的鑒定，39株肺炎克雷伯菌、42株大腸埃希菌、35株糞腸球菌的鑒定結(jié)果與醫(yī)院感染監(jiān)測系統(tǒng)資料及微生物室以往鑒定記錄相一致。 2.通過ESBLs初篩和確證試驗，39株肺炎克雷伯菌、42株大腸埃希菌ESBLs陽性株分別為17株、19株，檢出率分別為43.6％(17/39)、45.2％(19/42)。 3.39株肺炎克雷伯菌對20種抗生素的藥敏結(jié)果顯示：肺炎克雷伯菌對抗生素耐藥性較高的前5種抗生素依次為氨芐西林(AMP)、哌拉

5、西林(PIP)、氨芐西林/舒巴坦(SAM)、頭孢呋辛(CXM)和復(fù)方新諾明(SXT)，多重耐藥菌占實驗菌株的41.0％；敏感性較高的前5種抗生素依次為亞胺培南(IPM)、美洛培南(MEM)、頭孢吡肟(FEP)、哌拉西林/他唑巴坦(TZP)和阿米卡星(AMK)。 4.42株大腸埃希菌對20種抗生素藥敏結(jié)果顯示，大腸埃希菌對抗生素耐藥性較高的前5種抗生素依次為哌拉西林(PIP)、復(fù)方新諾明(SXT)、慶大霉素(GEN)、環(huán)丙沙星(C

6、IP)和頭孢克洛(CEC)，多重耐藥菌占實驗菌株的45.2％；敏感性較高的5種抗生素依次為亞胺培南(IPM)、美洛培南(MEM)、哌拉西林/他唑巴坦(TZP)、頭孢唑肟(CZX)和阿米卡星(AMK)。 5.肺炎克雷伯菌、大腸埃希菌ESBLs陽性株對絕大多數(shù)抗生素的耐藥程度均高于非產(chǎn)ESBLs株，且多呈多重耐藥或交叉耐藥。 6.本次實驗未見有亞胺培南(IPM)和美洛培南(MEM)耐藥肺炎克雷伯菌和大腸埃希菌菌株。

7、7.以XbaⅠ對肺炎克雷伯菌、大腸埃希菌染色體DNA進行酶切后電泳圖譜分別可顯示8～22條、4～22條DNA條帶，其分子量大小在30kb-700kb之間。以SmaⅠ酶對35株糞腸球菌染色體DNA進行酶切，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，糞腸球菌染色體DNA電泳圖譜可顯示4～16條DNA條帶，片段范圍約在40kb-750kb之間。 8.經(jīng)FingerprintingⅡ軟件分析，可大致將39株肺炎克雷伯菌、42株大腸埃希菌、35株糞腸球菌分別分為3群、

8、2群、2群，其中每一群又可細(xì)分為不同數(shù)目的亞群，型、亞型。 9.35株糞腸球菌對9種抗生素藥敏試驗顯示，最為敏感的抗生素為替考拉寧(TEC)，其次為氨芐西林(AMP)、萬古霉素(VAN)，其敏感率分別為97.8％、94.7％、78.9％；較為敏感的抗生素為氯霉素(CHL)、高單位的慶大霉素(GEN)，其敏感率分別為72.4％、67.7％；耐藥率最高的為利福平(RIF)，其次為紅霉素(ERY)、四環(huán)素(TCY)，其耐藥率分別為60

9、.5％、47.4％、46.1％。本次試驗未見有耐萬古霉素糞腸球菌，耐藥率較低的其次為替考拉寧(TEC)、氨芐西林(AMP)，耐藥率分別為2.2％、5.3％。 [結(jié)論](1)深圳市人民醫(yī)院肺炎克雷伯菌、大腸埃希菌耐藥現(xiàn)象嚴(yán)重，產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)檢出率高。 (2)產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌攜帶多個耐藥基因的現(xiàn)象較為普遍，常表現(xiàn)為多重耐藥或交叉耐藥。 (3)通過PFGE基因分型，發(fā)現(xiàn)不存在單獨的ESBLs