天津地區(qū)HEV動物宿主及其基因型的研究.pdf

1、目的：
　　1.選擇天津市不同區(qū)縣的豬、牛、羊、兔和狗作為研究對象，調(diào)查這些與人類生活密切相關(guān)的動物血清中HEV抗體的流行情況；
　　2.對采集的動物糞便標(biāo)本進(jìn)行RNA檢測，并對檢出的動物HEV RNA進(jìn)行基因型和亞型分析，從而對動物HEV與人類的HEV流行和傳播的相關(guān)性進(jìn)行進(jìn)一步闡釋。
　　方法：
　　1.在天津市武清區(qū)和寶坻區(qū)屠宰廠收集豬血液標(biāo)本202份，牛血液標(biāo)本97份，羊血液標(biāo)本163份，武清區(qū)、寶坻區(qū)和

2、西青區(qū)三個農(nóng)貿(mào)市場收集兔血液標(biāo)本78份，北辰區(qū)和西青區(qū)寵物醫(yī)院收集狗血液標(biāo)本188份，每份標(biāo)本1-2ml。所有標(biāo)本均低溫保存迅速運(yùn)送到實(shí)驗(yàn)室，分離血清，-20℃冷凍保存?zhèn)錂z。使用北京萬泰生物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的雙抗原夾心酶聯(lián)免疫檢測試劑盒檢測動物血清標(biāo)本中抗-HEV IgG抗體。
　　2.將天津市武清區(qū)和寶坻區(qū)屠宰廠收集的202份豬血液標(biāo)本，78份兔血液標(biāo)本，使用戊型肝炎病毒IgG抗體診斷試劑盒（上海B公司）進(jìn)行二次檢測，將檢測結(jié)果

3、與北京 A公司生產(chǎn)的雙抗原夾心酶聯(lián)免疫檢測試劑的檢測結(jié)果進(jìn)行比較。
　　3.對天津市武清區(qū)、西青區(qū)和寶坻區(qū)收集到的60份豬糞便標(biāo)本、50份兔糞便標(biāo)本、50例狗糞便標(biāo)本進(jìn)行HEV RNA檢測。用逆轉(zhuǎn)錄巢式PCR（RT-nPCR）檢測戊型肝炎病毒核糖核酸（HEV RNA），并對PCR陽性擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行克隆測序（北京諾賽基因組研究中心有限公司），用Bioeditv7.0.9和MEGA6.0軟件按目前新的分型方法所選用的參考序列進(jìn)行核苷酸序

4、列相似性比較和生物進(jìn)化樹分析。
　　結(jié)果：
　　1.天津地區(qū)屠宰場豬血清中抗-HEV陽性率為77.2％（156/202）；牛血清中抗-HEV陽性率為7.2%（7/97）；羊血清中抗-HEV陽性率為6.1%（10/163）；兔血清中抗-HEV陽性率為16.6%（13/78）；狗血清中抗-HEV陽性率為18.6%（35/188），其中流浪狗血清中抗-HEV陽性率為33.7%（29/86)，寵物狗血清中抗-HEV陽性率僅為5.9%

5、（6/102）；總體陽性率為30.3%（見表1）；流浪狗血清抗體水平為2.67±1.23，寵物狗血清中抗體水平為0.58±0.39，兩組數(shù)據(jù)存在顯著差異(P<0.05)。
　　2.上海B公司生產(chǎn)的戊型肝炎病毒IgG抗體診斷試劑盒陽性率低于北京A公司生產(chǎn)的抗-HEV抗體檢測試劑盒，兩種試劑符合率為95.7%（268/280）（表4），檢測結(jié)果具有一致性。
　　3.天津地區(qū)豬糞便標(biāo)本的HEV RNA陽性率為6.7%（4/60），

6、陽性標(biāo)本分別命名為sw-tj11、sw-tj17、sw-tj46、sw-tj48。其中sw-tj11與4g亞型相似性最高， sw-tj17與4a亞型相似度最高，sw-tj46、sw-tj48與4d亞型相似度最高，這兩株之間相似度為99%，應(yīng)該為同一病毒株感染；兔糞便標(biāo)本的HEV RNA陽性率為4%（2/50），陽性標(biāo)本分別命名為R-tj3、R-tj9，與基因3型的參考序列相似度為74%-90%，屬于基因3型；50例狗糞便懸液HEV RN

7、A檢測結(jié)果全部為陰性。
　　結(jié)論：
　　1.本次調(diào)查研究結(jié)果顯示天津地區(qū)與人密切接觸的五種動物總體抗 HEV IgG抗體陽性率為30.3%（221/728），五種動物均存在HEV的感染，且豬、狗、兔的自然感染比例較高，但人與這些動物密切接觸是否會感染HEV需要進(jìn)一步研究。
　　2.調(diào)查結(jié)果顯示流浪狗血清中抗HEV-IgG抗體水平與寵物狗抗HEV-IgG抗體水平存在顯著差異，流浪狗HEV傳播情況明顯要比寵物狗嚴(yán)重。