我國部分地區(qū)柑橘衰退病毒基因型研究.pdf

1、柑橘衰退病為柑橘上發(fā)生危害最嚴重的病毒病，在世晃主要柑橘產(chǎn)區(qū)均有發(fā)生。引起該病害的病原柑橘衰退病毒（Citrustristezavirus，CTV），屬于線形病毒科（Closteroviridae），長線形病毒屬（Closterovirus）。根據(jù)其在寄主植物上所引起的不同癥狀，可分為速衰株系、莖陷點株系和弱毒株系。根據(jù)CTV基因組序列特點，可將其分為T36,VT，T3和T30基因型，其中T30為弱毒株系，其它為強毒株系。為明確我國發(fā)生

2、的CTV基因型特點及其混合發(fā)生狀況，本研究對來自我國部分地區(qū)的CTV進行了分析，結(jié)果如下。
　　 1.比較分析了以總RNA為模板的常規(guī)RT-PCR、免疫捕捉RT-PCR(IC-RT-PCR)和試管捕捉RT-PCR(TC-RT-PCR)3種方法進行CTV檢測及株系區(qū)分的效果，結(jié)果顯示，3種方法檢測CTV均具較好的檢測效果，但采用總RNA為模板時在進行常規(guī)檢測及株系鑒定時，擴增產(chǎn)物的電泳條帶均相對更清晰些；其它兩種方法的擴增產(chǎn)物電泳

3、條帶雖相對較弱，不適合于用Bi-RT-PCR方法進行CTV株系的鑒定，但可用于大量樣品的CTV檢測。
　　 2.采用Bi-RT-PCR技術(shù)，對來自不同地區(qū)的141份柑橘樣品進行了CTV強毒和弱毒株系的鑒定。結(jié)果顯示，有107份柑橘樣品的CTV檢測結(jié)果為陽性，帶毒率為75.8％，且所檢測到的CTV均為強毒株系。
　　 3.選取10份柑橘樣品，對其CP進行了擴增及擴增產(chǎn)物的HinfⅠ/RFLP分析，根據(jù)Gillings(19

4、93)報道的分類規(guī)則，初步確定來自樣品S45的CTV(CTV-S45)為HinfⅠ/RFLP類群Ⅴ，LR1、S36、S37、S38和S39存在類群Ⅲ和Ⅴ的CTV混合感染，而樣品S46為我國新鑒定出的類群Ⅷ與類群V的混合侵染。
　　 4.選取以上8個CTV感染的柑橘樣品及本研究室前期鑒定獲得的2個CTV單一分離物感染的柑橘樣品，采用10對基因型鑒定引物對其進行基因型分析，結(jié)果顯示，除N21為VT基因型、N4為T30基因型CTV單一

5、感染外，5個樣品B15、B16、S36、S39和LR1存在基因型為VT、T36和T3的CTV混合感染；BX與S40存在4種基因型VT、T36、T3和T30的CTV混合感染；CTV-S45可能帶有T3和T30基因型。這些結(jié)果表明，CTV強致病性株系VT和T3型在我國發(fā)生普遍。
　　 5.對采用引物VT-K17擴增產(chǎn)物進行了克隆及序列分析，結(jié)果顯示，所測定分離物可較為明顯地分為VT基因型與T30基因型兩大類群。其中來自樣品S45的2

6、個分離物CTV-S45-2和CTV-S45-4與弱毒株系T30和T385親緣關(guān)系較近，其擴增片段的核苷酸和氨基酸同源性分別在96.6％和94.9％。其它分離物與VT基因型聚為一類，而在該基因型類群中存在較大的分子變異，這些分離物可進一步分為3個組群，不同組群間存在特異性的核苷酸和氨基酸位點差異。
　　 6.對CTV-S45的CP、K17和Pol基因及5'UTR作進一步測序和序列分析，發(fā)現(xiàn)其CP基因編碼氨基酸序列與T30同源性較高