日本腦炎病毒優(yōu)勢(shì)基因型分布及其轉(zhuǎn)換的機(jī)制研究.pdf

1、日本腦炎(Japanese Encephalitis，JE)主要流行于亞太地區(qū)，我國(guó)也是JE的流行區(qū)。據(jù)WHO統(tǒng)計(jì)，全球每年大約有6.8萬(wàn)JE臨床病例，其中大約50％發(fā)生在我國(guó)大陸。JE的病原體是日本腦炎病毒(Japanese Encephalitis virus，JEV)。JEV是一種蚊媒病毒，主要通過(guò)三帶喙庫(kù)蚊傳播，豬以及鷺科水鳥(niǎo)是其主要的增殖宿主。JEV只有一個(gè)血清型，但可劃分為5個(gè)基因型(Genotype)。在21世紀(jì)以前，JE

2、V的優(yōu)勢(shì)毒株是GⅢ株，研究發(fā)現(xiàn)，本世紀(jì)分離到的JEV毒株中GⅠ株越來(lái)越多。印度、韓國(guó)、日本、越南以及我國(guó)臺(tái)灣地區(qū)等地都已經(jīng)有了系統(tǒng)報(bào)道，證實(shí)GⅠ株已經(jīng)取代了GⅢ株，成為當(dāng)?shù)厝缃竦膬?yōu)勢(shì)流行株，表明上述各地均已發(fā)生了JEV優(yōu)勢(shì)基因型轉(zhuǎn)換。我國(guó)大陸的很多地區(qū)也已經(jīng)分離到了GⅠJEV，其中一株來(lái)源于接種過(guò)GⅢJE弱毒苗的男孩。JE作為一種人畜共患病，GⅠJEV的入侵以及優(yōu)勢(shì)基因型轉(zhuǎn)換所帶來(lái)的公共衛(wèi)生風(fēng)險(xiǎn)并未得到科學(xué)的評(píng)估，我國(guó)豬群中JEV優(yōu)勢(shì)基

3、因型的分布情況尚且不知，優(yōu)勢(shì)基因型轉(zhuǎn)換的機(jī)制仍有待解析。
　　本研究依據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，建立了一種區(qū)分GⅠ/ⅢJEV感染的抗體夾心ELISA方法。對(duì)2016年采集于我國(guó)內(nèi)蒙古自治區(qū)、廣西壯族自治區(qū)、江蘇省以及新疆維吾爾自治區(qū)等12個(gè)省市共計(jì)2232份豬（均未免疫JE疫苗）血清進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示上述地區(qū)全年的JEV抗體陽(yáng)性率為28.1％-59.5％不等。我國(guó)南方地區(qū)全年JEV抗體陽(yáng)性率相對(duì)較高，如廣東省的JEV抗體陽(yáng)性率高達(dá)59.5％，湖

4、南省的抗體陽(yáng)性率可至53.2％，而位于西北的新疆維吾爾自治區(qū)的豬群中JEV抗體陽(yáng)性率僅為28.3％。進(jìn)一步統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，上述各地樣品中GⅠ/Ⅲ之間的數(shù)量比值在1.3-2.8之間。其中青海省的比值最高，為2.8;湖南省、江蘇省以及內(nèi)蒙古自治區(qū)的比值最低，為1.3。本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)上述各地的GⅠ/Ⅲ樣品數(shù)量比值均高于1，表明我國(guó)大部分地區(qū)現(xiàn)均以GⅠJEV流行為主。
　　為了闡明優(yōu)勢(shì)基因型轉(zhuǎn)換的可能機(jī)制，我們對(duì)采樣地區(qū)的氣候、經(jīng)、緯度等一系列生

5、態(tài)信息進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)、分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)優(yōu)勢(shì)基因型的分布與我國(guó)氣候分布并無(wú)明顯相關(guān)性。為了探尋JEV優(yōu)勢(shì)基因型轉(zhuǎn)換是否與病毒的宿主嗜性有關(guān)，我們繪制了本實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)今分離保存的7株JEV(3株GⅠ，4株GⅢ)在不同宿主細(xì)胞上的多步生長(zhǎng)曲線。結(jié)果發(fā)現(xiàn)G/ⅢJEV在C6/36(蚊源)和PIEC(豬源)細(xì)胞上并未表現(xiàn)出明顯的差異，但在DF-1（禽源）細(xì)胞上，GⅠJEV較GⅢJEV表現(xiàn)出明顯的復(fù)制優(yōu)勢(shì)。為了進(jìn)一步驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們以2-3日齡的雛麻鴨為模式

6、動(dòng)物，選用6株JEV(3株GⅠ，3株GⅢ)對(duì)雛鴨進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室感染，然后檢測(cè)鴨子體內(nèi)的病毒血癥水平。結(jié)果顯示GⅠJEV較GⅢJEV在鴨子體內(nèi)可產(chǎn)生滴度更高、持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng)的病毒血癥。該現(xiàn)象有利于蚊子更易吸食到含有JEV的血液，從而將JEV傳播給其它易感宿主，以造成更大范圍感染，促進(jìn)GⅠJEV在自然界的傳播。
　　本研究從血清流行病學(xué)的角度揭示了我國(guó)豬群中以GⅠJEV流行為主，證實(shí)優(yōu)勢(shì)毒株的分布與我國(guó)的氣候分布無(wú)明顯直接聯(lián)系。水禽作為JE